【摘 要】
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目的 探究外源性及内源性Klotho 蛋白在肾小管上皮细胞氧化应激损伤中的作用及可能的作用机制,以期为Klotho 蛋白在临床上的应用提供参考依据.方法 体外培养TCMK-1 细胞,应用外源性Klotho 蛋白对H2O2 刺激TCMK-1 细胞进行治疗,通过CCK-8 实验检测细胞活性;Annexin V/PI 染色流式细胞术(FACS)以及Hoechst 33258 染色检测细胞凋亡情况;DCF
【机 构】
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上海交通大学医学院附属仁济医院肾脏科 上海市免疫学研究所
【出 处】
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中华医学会肾脏病学分会2014年学术年会
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目的 探究外源性及内源性Klotho 蛋白在肾小管上皮细胞氧化应激损伤中的作用及可能的作用机制,以期为Klotho 蛋白在临床上的应用提供参考依据.方法 体外培养TCMK-1 细胞,应用外源性Klotho 蛋白对H2O2 刺激TCMK-1 细胞进行治疗,通过CCK-8 实验检测细胞活性;Annexin V/PI 染色流式细胞术(FACS)以及Hoechst 33258 染色检测细胞凋亡情况;DCFH-DA 探针标示检测细胞内活性氧族(ROS)生成情况;Western blotting 检测Klotho、Bax、Bcl-2、SOD2、CAT、MAPKs 等蛋白表达的变化,观察Klotho 蛋白对TCMK-1 细胞凋亡和氧化应激损伤的保护作用.构建稳定表达Klotho 分子的TCMK-1 细胞株,将构建的稳定表达Klotho 分子及空载体的TCMK-1 细胞株分别分为正常对照组和0.5 mM H2O2 刺激组,观察内源性Klotho 高表达对H2O2 引起的TCMK-1 细胞损伤的保护作用.
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