论文部分内容阅读
目的：本研究通过观察丹参素对体外大鼠骨髓基质干细胞(Marrow stromal stem cells,MSCs)成骨分化能力的影响,以探讨丹参素对骨髓基质干细胞的分化方向的调节作用；通过对比丹参素与DKK-1抗体对骨髓基质干细胞增殖、分化的影响,以及对调控骨髓基质干细胞的分化方向的Wnt/β-catenin信号通路中的Dickkopf-1、β-catenin基因及蛋白表达的影响,以探讨丹参素对骨髓基质干细胞分化方向调控的作用机制。为丹参素用于防治骨质疏松提供科学依据。方法：通过传代贴壁筛选的方法分离纯化骨髓基质干细胞。选用纯化的大鼠骨髓基质干细胞，通过加入不同浓度丹参素、DKK-1抗体以及丹参素联合DKK-1抗体等药物作用后，观察骨髓基质干细胞碱性磷酸酶活性的变化、骨结节的形成，分析药物对骨髓基质干细胞成骨分化能力的影响；提取细胞总RNA，经RT PCR检测细胞内Dickkopf-1 mRNA与p-catenin mRNA的表达，探讨丹参素是否通过调节Wnt/(3-catenin信号通路来影响大鼠骨髓基质干细胞分化方向；通过检测提取的细胞总蛋白中Dickkopf-1蛋白与p-catenin蛋白的表达量，进一步验证丹参素影响骨髓基质干细胞分化方向的机制。结果及结论：丹参素与DKK-1抗体均有不同程度的促进大鼠骨髓基质干细胞增殖，增加MSCs的碱性磷酸酶活性，促进骨结节形成，促进其向成骨细胞分化的作用。通过对比己知的Wnt/β-catenin信号通路活化药物DKK-1抗体，发现丹参素是通过作用于Wnt/β-catenin信号通路，减少Dickkopf-1的表达，增加β-catenin的表达，达到调节大鼠骨髓基质干细胞向成骨方向分化的效果的。提示丹参素能通过影响Wnt/β-catenin信号通路的机制发挥抗骨质疏松的作用。