【摘 要】
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人骨形态发生蛋白-7(Human bone morphogenetic protein-7,hBMP-7)又名成骨蛋白-1 (Osteogenic Protein,OP-1),是一种重要的成骨生长因子,其在肾脏的形态发生中亦起重要
【机 构】
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山东省医学科学院济南大学医学与生命科学学院
【出 处】
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华东六省一市生物化学与分子生物学会2015年学术交流会
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人骨形态发生蛋白-7(Human bone morphogenetic protein-7,hBMP-7)又名成骨蛋白-1 (Osteogenic Protein,OP-1),是一种重要的成骨生长因子,其在肾脏的形态发生中亦起重要作用,被称为重要的"肾脏形态发生源".hBMP-7基因编码一个含有139个氨基酸残基的成熟肽,其活性形式是一种二聚体糖蛋白,单体或无糖基化的hBMP-7没有生物活性或生物活性很低.本实验室前期研究表明大肠杆菌表达的hBMP-7生物活性很低,复性困难.本实验拟以人源癌细胞U2-OS作为表达系统,利用人源癌细胞快速增殖及高效的翻译后修饰系统的特性来表达hBMP-7.实验以pcDNA3作为载体,以不带自身信号肽的含有453个碱基对的rhBMP7基因序列作为目的基因,构建hBMP-7表达载体(rhBMP7-pcDNA3),利用BamHI与HindⅢ进行双酶切验证；再以Lipofectamine2000作为转染介质将其转染导入U2-OS细胞；利用RT-qPCR检测hBMP-7基因在U2-OS细胞中的转录.双酶切结果显示rhBMP7-pcDNA3构建成功；RT-qPCR检测结果以2^(-△△Ct)值表示：rhBMP7-pcDNA3组其均值为0.0075,pcDNA3组其均值为0.8285,表明rhBMP7-pcDNA3组hBMP-7基因成功转入U2-OS细胞并可转录表达.
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