【摘 要】
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目的:研究雷公藤多苷片(TWP)对TNBS/乙醇溃疡性结肠炎(UC)大鼠miR-146a,miR-146b及TLR4/MyD88依赖信号通路的调控作用.方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠的方法建立TNBS/乙醇UC大鼠模型.模型建立成功后,将90只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、TWP低、中、高剂量组(3、6、12mg/kg)、硫唑嘌呤(AZA)组(6g/kg),每组15只
【机 构】
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浙江中医药大学第一临床医学院,浙江杭州310053 浙江中医药大学附属第一医院消化内科,浙江杭州3
【出 处】
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中华中医药学会脾胃病分会第二十八届全国脾胃病学术交流会
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目的:研究雷公藤多苷片(TWP)对TNBS/乙醇溃疡性结肠炎(UC)大鼠miR-146a,miR-146b及TLR4/MyD88依赖信号通路的调控作用.
方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠的方法建立TNBS/乙醇UC大鼠模型.模型建立成功后,将90只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、TWP低、中、高剂量组(3、6、12mg/kg)、硫唑嘌呤(AZA)组(6g/kg),每组15只.各组分别给予相应药物连续灌胃14天.14天后解剖所有大鼠,留取相应结肠组织进行各组大鼠结肠组织大体及镜下病理评分.采用qPCR法检测miR-146a,miR-146b的表达情况;westem blotting法和RT-PCR法检测大鼠结肠组织中TLR4/MyD88依赖信号通路相关分子(TLR4/MyD88/TRAF-6/NF-κB/TNF-α/IL-1β)在mRNA及蛋白水平的表达情况.
结果:DAI评分,大体及镜下表现和评分均提示TNBS/乙醇UC大鼠模型造模成功,TWP对UC大鼠临床症状的改善及黏膜愈合具有一定作用,该作用与AZA相比相当或强于AZA.qRT-PCR结果提示:与正常对照组相比,模型对照组中miR-146a,miR-146b表达明显增加(p＜0.01).与模型对照组相比,药物TWP及AZA均可显著抑制miR-146a,miR-146b(p＜0.01).其中TWP中剂量组对两者的抑制作用最强.RT-PCR及WB实验均提示:与正常对照组相比,模型对照组中TLR4/MyD88依赖信号通路相关的分子无论在mRNA还是蛋白水平表达均显著升高(p＜0.01).与模型对照组相比,TWP呈剂量依赖性地抑制该信号通路上各节点分子mRNA及蛋白水平的表达,其中TWP高剂量组中各节点分子mRNA及蛋白表达水平低于模型对照组(p＜0.05).在与阳性对照组AZA组比较,TWP高剂量组对该信号通路上游因子(TLR4/MyD88/TRAF-6/NF-κB)mRNA及蛋白表达水平的抑制作用略好于AZA组,而对末端炎症因子TNF-αt及IL-1βmRNA及蛋白水平的抑制作用却略逊于AZA组,但上述两种差异均无统计学意义(p＞0.05).
结论:在TNBS/乙醇UC大鼠模型中,TWP能通过抑制miR-146a,miR-146b的表达,并能抑制TLR4/MyD88依赖信号通路及炎症因子IL-1β及TNF-α释放,对信号通路及炎症因子的作用强度与剂量呈正相关.
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