【摘 要】
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目的通过夹闭左肾动脉15 min造成预缺血,恢复灌注10 min,再次夹闭左侧肾动脉45 min后恢复灌注,构建大鼠肾脏缺血预适应(IPC)动物模型,检测内皮祖细胞(EPCs)的归巢动力学特征
【机 构】
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南京医科大学附属南京医院泌尿外科、肾移植中心;
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目的通过夹闭左肾动脉15 min造成预缺血,恢复灌注10 min,再次夹闭左侧肾动脉45 min后恢复灌注,构建大鼠肾脏缺血预适应(IPC)动物模型,检测内皮祖细胞(EPCs)的归巢动力学特征及VEGF、SDF-1的差异表达,探讨EPCs在大鼠IPC肾脏中的作用以及可能机制。方法 75只雄性清洁级SD大鼠行右肾切除后随机分为:假手术组(sham组,n=25)、缺血再灌注组(I/R组,n=25)和缺血预适应组(IPC组,n=25),1周后采用夹闭左侧肾动脉45 min后恢复灌注的方法建立肾缺血再灌注损伤(IRI)大鼠模型;IPC组大鼠给予肾脏15 min预缺血,恢复灌注10 min,再次夹闭左侧肾动脉45min后恢复灌注。(1)观察IPC后不同时间内(3 h、24 h、3 d、7 d、14 d,n=5)血清Cr、BUN、肾组织形态学变化以及对细胞凋亡的影响;(2)采用免疫组化技术分析内皮祖细胞(EPCs)的归巢特征;(3)采用Western blot法检测血管内皮生长因子(VEGF)和基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的表达水平。结果 IPC组大鼠肾脏损伤程度较I/R组显著减轻,表现为肾小管上皮细胞死亡脱落,管腔扩张,间质水肿及炎症细胞浸润明显减少,且BUN以及SCr水平明显下降(P<0.05)。再灌注72 h后,IPC组大鼠肾小管上皮细胞凋亡数量较I/R组明显下降[(17.6±4.45)%vs.(63.8±6.10)%,P<0.01]。另外,IPC组大鼠肾脏组织中EPCs表达明显多于I/R组,主要集中在肾髓质乳头区域,靠近肾小管周围毛细血管附近的空隙,肾组织中VEGF、SDF-1蛋白表达水平也显著升高(P<0.05)。结论 IPC可通过诱导EPCs归巢,促进VEGF、SDF-1分泌,提高抗肾小管细胞凋亡能力,显著改善肾脏IRI。
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