【摘 要】
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噻唑菌胺(ethaboxam)是韩国LG生命科学公司(原LG化学有限公司)开发的噻唑酰胺类杀菌剂,其作用机制尚不明确.噻唑菌胺的防治对象主要为致病疫霉(Phytophthora infestans)、葡萄霜霉(Plasmopara viticola)、辣椒疫霉(Phytophthora capsici)和古巴假霜霉(Pseudoperonospora cubensis等植物病原卵菌.本研究前期通过
【机 构】
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中国农业大学植物病理学系,北京100193
【出 处】
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第十一届中国植物病害化学防治学术研讨会
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噻唑菌胺(ethaboxam)是韩国LG生命科学公司(原LG化学有限公司)开发的噻唑酰胺类杀菌剂,其作用机制尚不明确.噻唑菌胺的防治对象主要为致病疫霉(Phytophthora infestans)、葡萄霜霉(Plasmopara viticola)、辣椒疫霉(Phytophthora capsici)和古巴假霜霉(Pseudoperonospora cubensis等植物病原卵菌.本研究前期通过室内药剂驯化的方法,以两株敏感野生型大豆疫霉菌株P6497和PSDZT2-14为亲本,共获得20株抗性稳定的抗药性突变体.其中从P6497和PSDZT2-14中分别筛选获得了6株和4株抗性倍数低于40倍的低抗突变体,从PSDZT2-14筛选获得了10株抗性倍数大于1000倍的高抗突变体.本研究拟以前期获得的不同抗性倍数的抗药性突变体为材料,进一步分析和验证了大豆疫霉对噻唑菌胺的抗性分子机制.前期交互抗药性研究结果表明噻唑菌胺与微管蛋白抑制剂苯酰菌胺存在正交互抗药性,同时结合国际杀菌剂抗药性委员会FRAC分类,推测噻唑菌胺也为微管蛋白抑制剂且其作用靶标蛋白为beta-tubulin.因此,本研究扩增了大豆疫霉亲本菌株及其突变体的beta-tubulin基因全长,并进行测序和比对分析.结果 表明,P6497系列低抗突变体8位密码子CAG纯合突变为CTG,导致了8位谷氨酰胺突变为亮氨酸(Q8L)；PSDZT2-14系列低抗突变体258位密码子ATC纯合突变为GTC,导致了258位异亮氨酸突变为缬氨酸(I258V)；PSDZT2-14系列高抗突变体165位密码子TGC纯合突变为TAC,导致了165位半胱氨酸突变为酪氨酸(C165Y).利用CRISPR/Cas9技术和PEG-CaCl2介导的遗传转化方法,将野生敏感菌株P6497的beta-tubulin进行定点突变,分别获得了6株Q8L和8株I258V转化子,均对噻唑菌胺表现出低倍抗性；获得了6株C165Y转化子,均对噻唑菌胺表现出高倍抗性.进一步进行回补试验,分别获得了8株L8Q、6株V258I和7株Y165C的回补转化子,且其对噻唑菌胺的敏感性均恢复到亲本水平.以上研究结果证实了大豆疫霉微管蛋白beta-tubulin上Q8L、I258V和C165Y点突变导致了大豆疫霉对噻唑菌胺不同水平的抗药性.
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