【摘 要】
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目的 通过构建小RNA干扰PTH1R基因的载体并鉴定后,转染INS-1细胞,检测其转染率,建立甲状旁腺素受体1基因沉默的INS-1细胞模型,为阐明PTH1R在高糖状态下INS-1作用机制研究
【机 构】
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510515 广州,南方医院内分泌代谢科
【出 处】
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中华医学会第九次全国内分泌学学术会议
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目的 通过构建小RNA干扰PTH1R基因的载体并鉴定后,转染INS-1细胞,检测其转染率,建立甲状旁腺素受体1基因沉默的INS-1细胞模型,为阐明PTH1R在高糖状态下INS-1作用机制研究提供技术保证。方法 (1)在线寻找合适的PTH1R干扰靶点,筛选出三个阳性基因序列及一个阴性基因序列合成干扰片段后用于实验。(2)建立PTH1R干扰载体:将合成寡脱氧核苷酸退火,进行pSUPERretro-GFP/Neo载体的酶切,退火形成的DNA双链与双酶切载体按一定比例进行连接,将连接产物转化到DH5α感受态中菌落PCR,初步筛选出阳性基因序列,并进行测序,最终确定阳性基因序列。
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