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背景:汉坦病毒(HTNV)属于布尼亚病毒科的一种负性RNA病毒,可导致肾综合征出血热(HFRS),其主要临床表现为发热、出血、急性肾功能损伤。我国占该病世界总发病人数的90%以上,严重威胁我国公众卫生安全。同时HTNV被多国政府及军方视为潜在生物战剂,因此其疫苗研制具有重要意义。研究表明,汉坦病毒包膜糖蛋白Gn及Gc可诱导机体产生良好的免疫应答。本课题组前期构建的溶酶体相关膜蛋白(LAMP)与Gn重组基因疫苗可在小鼠体内建立长期的免疫保护效力。目的 :构建LAMP/Gc重组基因疫苗,并评价其在Balb/C小鼠体内的免疫保护效力。方法 :利用p VAX载体分别构建载体p VAX-Gc、p VAX-LAMP-Gc为实验组,设p VAX、p VAX-LAMP为实验对照组,灭活疫苗为阳性对照组。测序鉴定后在真核细胞中鉴定目的蛋白的表达,并提取高纯度的去内毒素质粒。将BALB/c小鼠随机分为5组,分三次间隔三周免疫,半年后加强免疫一次,进行长效免疫的评价。每次免疫两周后进行尾静脉取血,通过检测特异性抗体及中和抗体效价进行体液免疫评价;通过酶联免疫斑点实验(ELISpot)进行细胞免疫评价;建立体内感染模型,预防性免疫接种后进行攻毒实验评价体内的免疫保护效力。结果 :ELISA结果显示p VAX-LAMP-Gc组的特异性抗体滴度明显高于p VAX-Gc和灭活疫苗组(P<0.05),三次免疫后p VAX-LAMP-Gc组平均抗体效价可以高达1:2560;ELISpot结果显示p VAX-LAMP-Gc组IFN-γ分泌频率提高2~3倍,p VAX-Gc和灭活疫苗组未见明显差异。攻毒结果显示Gc、LAMP/Gc组及灭活疫苗组均可在小鼠体内产生良好的免疫保护效力。结论 :LAMP分子靶向溶酶体的策略通过抗原加工提呈途径的转化大大提高了机体对汉坦病毒包膜糖蛋白Gc的特异性免疫应答,具有较好的应用前景。