抗菌肽(Antimicrobial peptides)是生物体内产生的一种阳离子小分子多肽,广泛存在于植物和动物体内,是天然免疫防御系统的一部分。由于兽医临床上抗生素的大量使用导致耐药性菌株的产生,抗菌肽具有独特的杀菌机制,使微生物不易产生耐药性,因此,抗菌肽成为开发新型抗生素替代物的重要选择。绵羊抗菌肽GNLY的抗微生物活性和功能尚不清楚。【目的】本项研究旨在通过酵母表达体系表达绵羊GNLY重组蛋白,研究其体外抑菌活性以及对肿瘤细胞生长的抑制作用。【方法】应用RT-PCR方法扩增重组绵羊GNLY基因,将该基因插入到酵母表达质粒构建重组质粒p PICZαA-GNLY,并转化毕赤酵母菌菌株X-33(Pichia Pastoris X-33)用甲醇进行重组绵羊GNLY蛋白的诱导表达,对表达产物采用丙酮三氯乙酸沉淀、亲和层析纯化,并通过SDS-PAGE电泳、Wesetmblot进行鉴定;通过径向扩散实验、MIC抑菌试验验证其抗菌谱和抗菌活性,MTT法测定肿瘤细胞抑制活性。【结果】成功构建了重组绵羊GNLY真核酵母表达载体,并在毕赤酵母中诱导重组绵羊GNLY蛋白的分泌性表达,表达量可达1.3 mg/L。纯化的重组GNLY蛋白对大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、金黄色葡萄球菌均具有显著的抑制作用,对人食管癌EC109、人肾癌X780-6细胞生长具有明显的抑制作用。【结论】在毕赤酵母中成功诱导表达重组绵羊GNLY蛋白,该蛋白具有良好的抗菌和抑制肿瘤细胞活性,为进一步研发抗菌肽类药物提供了候选材料。