【摘 要】
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目的 探讨LRP16基因对MIN6细胞增殖,胰岛素分泌,凋亡的影响及其机制。方法 (1)构建针对LRP16基因的shRNA慢病毒载体,并包装慢病毒,用相同的方法,慢病毒包装可表达GFP的质
【机 构】
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100853北京,解放军总医院内分泌科
【出 处】
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中华医学会第九次全国内分泌学学术会议
论文部分内容阅读
目的 探讨LRP16基因对MIN6细胞增殖,胰岛素分泌,凋亡的影响及其机制。方法 (1)构建针对LRP16基因的shRNA慢病毒载体,并包装慢病毒,用相同的方法,慢病毒包装可表达GFP的质粒作为阴性对照；(2)分别转染MIN6细胞,通过Blasticidin筛选稳定细胞系后分别标记为：MIN6-GFP,MIN6-LRP16；(3)MTT检测细胞增殖曲线；(4)分别用0mmol/L、2mmol/L和5 mmol/L、10 mmol/L、15mmol/L、25 mmol/L葡萄糖浓度和30 mmol/L KCL刺激细胞,并检测胰岛素分泌；(5)用RIA方法检测胰岛素含量；(6) Q-PCR检测：cyclinDs,cyclinE,IRS2,PDX-1,Mafa,NeuroD,Glut2,INS； (7) Western印迹方法检测：cyclinDS,IRS2,PDX-1,Mafa,NeuroD,Glut2,Bcl-2,bax,caspase-3；(8)流式细胞仪检测细胞增殖；(9)流式细胞仪检测细胞凋亡。
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