【摘 要】
：
以牛分支杆菌vallee株基因组DNA为模板,应用PCR法扩增hsp65和esat6两个基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)获得融合基因hsp65-esat6,将hsp65-esat6连接到原核表达载体pET32a(+)上,构建原核重组表达质粒pET65-E6,将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG进行诱导(终浓度1mmol/L),进行SDS-PAGE电泳分析,结果表明:
【机 构】
：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,动物细菌病研究室,哈尔滨,150001;吉林农业大学生物技术学院,长春,130118
【出 处】
：
中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会
论文部分内容阅读
以牛分支杆菌vallee株基因组DNA为模板,应用PCR法扩增hsp65和esat6两个基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)获得融合基因hsp65-esat6,将hsp65-esat6连接到原核表达载体pET32a(+)上,构建原核重组表达质粒pET65-E6,将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG进行诱导(终浓度1mmol/L),进行SDS-PAGE电泳分析,结果表明:Hsp65-ESAT6融合蛋白是以包涵体形式表达,融合蛋白pET65-E6裂解为两部分,即58KD和30KD,两个蛋白分子量相加与预测的88KD相符,将表达的融合蛋白经Ni2+亲和层析的方法纯化.
其他文献
牛蛙皮肤组织为材料获得总RNA,用偶联有Olido(dT)的磁珠纯化mRNA后,利用含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一链,以含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物和SMART引物,利用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经SfiⅠ酶切,通过T4DNA连接酶连接到经过相同酶切的λTripIEx2载体,体外包装后转染E.coli XLI-Blue宿主菌,进行滴度测试和
采用混合酸酐法,将本实验室合成的模拟磺胺类药物母核结构的半抗原N-磺胺-4-氨基苯甲酸(SDL),与人血清白蛋白(HSA)相连制备了免疫抗原(SDL-HSA),与卵清白蛋白(OVA)相连制备了包被抗原(SDL-OVA).用SDL-HSA免疫BALB/c小鼠,经融合,筛选和3次克隆得到了分泌抗磺胺类药物单克隆抗体的杂交瘤细胞株.间接竞争ELISA表明,该单抗能用于多种磺胺类药物残留的免疫分析.
研究了自制中草药免疫增效剂--"疫佳灵"对单核细胞、嗜酸性白细胞吞噬白色葡萄菌能力的影响.将12日龄海兰褐公鸡60只随机分成3组,即试验Ⅰ组,试验Ⅱ组和对照组.Ⅰ组为饮水中中草药免疫增效剂的终浓度为1％;Ⅱ组为饮水中中草药免疫增效剂的终浓度为0.5％;对照组只自由饮水,不加任何药物成分.在第22、32、42、52、62日龄时翅下采血,涂片,镜检.结果表明:1％组的效果最好,优于0.5％组,差异极显
2005年夏秋季从广东地区病死猪体内分离到2株猪源链球菌,并进行了病原学研究.细菌在形态上呈链球菌的特征,α溶血,两分离株的生化试验结果相似,且都不与A～G链球菌群特异性血清发生凝集.经PCR鉴定,结果一株为猪链球菌2型,另一株为猪链球菌9型.动物试验结果表明,2型分离株对小鼠的毒力较低,但能在接种细菌5～15天后使小鼠发病致死;9型分离株对小鼠有较强毒力,能使小鼠接种细菌5天内发病死亡,其对小鼠
根据实际应用情况确定ND、H9半成品的细菌内毒素限值为每1mL中含内毒素量应小于35EU.经干扰试验确证,ND、H9半成品在140倍稀释后对细菌内毒素检查无干扰作用.按拟订标准检验,本品共批26样品,其中批号为060421、060426、060427、060601、060602、060603样品其细菌内毒素检查结果符合规定,其余20批样品细菌内毒素检查不符合规定.
根据外膜蛋白基因中间部分的差异,毒素基因和荚膜基因的型特异性,建立3个多重PCR的分型体系,可将App1～12型分成11个模式,除9型和11型外完全区分.此分型体系用于临床分离株JS3,ZJ5和JS7的分型,得出的结果和血清学分型一致.对人工发病猪扁桃体和肺脏各12份,鼻拭子8份,-20℃保存一年的人工发病猪扁桃体和肺脏各3份分型结果与已知血清型一致.从35份临床可疑病料中检测出2份阳性,均为7型
[目的]山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)是由山羊支原体山羊肺炎亚种(M.capricolum subsp.Capripneumoniae,Mccp)引起的高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为B类传染病.我国目前对于CCPP的病原的分类地位的看法与国际标准不符.本实验计划对4株丝状支原体簇中国分离菌种进行分子生物学鉴定
对广东从化一个鸡场的发病鸡的流行病学进行调查,通过现场观察和实验诊断,确定为细菌混合感染;通过细菌的分离和鉴定,确诊该鸡场鸡群同时感染了葡萄球菌和多杀性巴氏杆菌,对这两种细菌做了药敏实验,结果表明该鸡场的这两种细菌对一些常规的抗生素已经产生了耐药性,该结果也为治疗和预防整个鸡群提供了科学依据.
利用PCR技术从牛分枝杆菌ValleeⅢ菌株中扩增出esat-6、mpb70和mpb83基因,通过重叠延伸剪接技术(SOE)合成mpb70-mpb83融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDNA-esat-6(简称为pCE6)和pCDNA-mpb70-mpb83-esat-6(简称为pC70-83-E6).体外转染SP2/0细胞,间接免疫荧光检测目的基因的表达情况.然后
抗菌肽(antimicrobial peptide)是一类广泛存在于植物和动物体内的阳离子小分子多肽,在生物天然免疫和获得性免疫中发挥着重要作用.利用RT-PCR的方法从牛蛙皮肤组织中克隆到大小为270bp的片段RCABP,首先将其克隆到pPGEM-T载体上,测序获得一个新的碱基序列.再将此基因克隆到原核表达载体pQE-80L,获得融合表达质粒pQE-80L/DHFR/na,在1％IPTG诱导下进