【摘 要】
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目的:1观察丙酮酸乙酯对谷氨酸诱导体外培养新生大鼠小脑颗粒神经元死亡的保护作用.2研究丙酮酸乙酯的神经保护作用机理.观察丙酮酸乙酯是否通过抑制细胞内钙的升高而拮抗谷氨酸的神经毒性.方法:1.实验对象体外原代培养7天的小脑颗粒神经元,分离于7日龄新生乳鼠小脑组织.2.实验方法大鼠小脑颗粒神经元的原代培养;采用四唑盐比色法(34,5-Dimethylthiazol-2-yl-2,5-diphenylt
【机 构】
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中山大学孙逸仙纪念医院儿科 510120
【出 处】
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中华医学会第十八次全国儿科学术会议
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目的:1观察丙酮酸乙酯对谷氨酸诱导体外培养新生大鼠小脑颗粒神经元死亡的保护作用.2研究丙酮酸乙酯的神经保护作用机理.观察丙酮酸乙酯是否通过抑制细胞内钙的升高而拮抗谷氨酸的神经毒性.方法:1.实验对象体外原代培养7天的小脑颗粒神经元,分离于7日龄新生乳鼠小脑组织.2.实验方法大鼠小脑颗粒神经元的原代培养;采用四唑盐比色法(34,5-Dimethylthiazol-2-yl-2,5-diphenyltetrazolium bromide MTT)法及FDA/PI荧光双染色法测定细胞存活率;采用相差显微镜行细胞形态学分析;Hoechst 33258核染色法分析核形态学变化;FLU03/AM法检测细胞内游离钙[Ca2+]i浓度.结果:一.谷氨酸对体外培养小脑颗粒神经元的毒性作用。1.谷氨酸呈剂量依赖性地诱导小脑颗粒神经元死亡(Ecso为75uM )。谷氨酸(100uM)呈时间依赖性地诱导小脑颗粒神经元死亡(15小时细胞存活率为50％ )。谷氨酸诱导小脑颗粒神经元死亡的方式包括坏死和凋亡，其中主要为坏死。二.丙酮酸乙酯、MK-801拮抗谷氨酸的兴奋性毒性作用。1.不同浓度的丙酮酸乙酯(0.1 mM-15mM)对原代培养的小脑颗粒神经元(7DIV)无毒性作用。细胞存活率为(99.4±1.8)％至(95.2±2.1)％。2.丙酮酸乙酯(0.1 mM-10mM)可剂量依赖性地拮抗谷氨酸的兴奋性毒性作用，丙酮酸乙酷(浓度为2.5uM时)预处理组细胞存活率达(85.7±1.3)％;MK-801(10uM)(一种非竞争性NMDA受体拮抗剂)预处理组细胞存活率达(81.1±1.9)％;单独谷氨酸组细胞存活率为(26.3±4.1)％，与以上二组之间存在显著性差异。三丙酮酸乙酯抑制细胞内钙升高保护小脑颗粒神经元死亡。在7DIV神经元培养基中加入谷氨酸，检测到细胞内钙迅速升高并达到高峰，20分钟后仍高于正常。丙酮酸乙酷通过阻滞细胞内[Ca]i升高而起到神经保护作用。结论:1.丙酮酸乙酷呈剂量依赖性和时间依赖性地拮抗谷氨酸对体外培养小脑颗粒神经元的兴奋性毒性作用。2.丙酮酸乙酷通过抑制细胞内钙升高而拮抗谷氨酸的兴奋性毒性作用。
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