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<正>目的: 制备新的鼠抗人PD-L1单克隆抗体并研究其潜在的生物学功能。方法: 使用细胞融合技术制备稳定分泌鼠抗人单克隆抗体的杂交瘤细胞株,免疫原细胞为 PD-L1转L929转基因细胞株和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231。抗体特性的鉴定通过流式细胞术、 Western-blott、快速定性试纸、免疫组织化学分析和竞争抑制试验。T细胞的增殖通过3h-TdR掺入实验测定。肿瘤细胞的裂解率通过LDH检测试剂盒测定。结果: 单克隆抗体2H11和10E10的重链均为IgG1类,轻链均为K型。westem-blot结果显示抗体2H11特异性识别分子量在30-35之间的蛋白条带。抗体2H11和10E10均可以用于免疫组织化学分析,特异性识别肺癌组织中的PD-L1分子。竞争抑制试验的结果显示抗体2H11识别的抗原为点和MIHI(anti-PD-L1 mAb,ebioscience)不完全相同,而2H11识别的位点和MIHI几乎完全相伺。两株抗体均能特异性识别表达在活化的T细胞、B细胞、NK细胞表面的PD-L1分子,同时识别在一系列的肿瘤细胞表面表达的PD-L1分子。单克隆抗体2H11和10E10能有效地促进T细胞的增殖, 同时促进T细胞分泌IL-2和IL-10:在CTL杀伤肿瘤细胞体系中,两株抗体显著提高了肿瘤细胞的裂解率。讨论:我们成功制备了两株鼠抗人PD-L1单克隆抗体2H11和10E10,它们识别不同的抗原位点,可以应用于PD-L1分子ELISA检测试剂盒的制备。同时抗体2H11可以用于Western-blot,2H11 和10E10都可以用于免疫组织化学分析。生物学功能研究显示两株抗体能够阻断PD-L1分子作用通路,促进T细胞的增殖和细胞因子的分泌,是两株阻断型的功能抗体。在肿瘤细胞和CTL作用体系中,抗体中和肿瘤细胞表面表达的PD-L1分子,促进CTL的增殖,增强对肿瘤细胞的杀伤率。这两株抗体在共刺激分子的网络调节研究中具有重要的理论价值,并在肿瘤的临床治疗中具备潜在的应用价值。