【摘 要】
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目的：在课题组目的是研究p53蛋白对黏菌素诱导PC12细胞发生的自噬是否存在调节作用.方法：PC12细胞转染p53siRNA/p53过表达质粒,以沉默或过表达p53蛋白,并通过免疫荧光确定p53蛋白的亚细胞定位.将黏菌素作用于PC12细胞12h或24h,采用免疫印迹法检测细胞自噬和凋亡的相关蛋白表达量变化,结合形态学变化和一系列生化指标改变,分析并探讨p53基因沉默及过表达在黏菌素诱导自噬过程中的
【机 构】
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东北农业大学动物医学学院,哈尔滨150030;沈阳工学院生命工程学院,抚顺113122 东北农业大
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十四次学术讨论会
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目的：在课题组目的是研究p53蛋白对黏菌素诱导PC12细胞发生的自噬是否存在调节作用.
方法：PC12细胞转染p53siRNA/p53过表达质粒,以沉默或过表达p53蛋白,并通过免疫荧光确定p53蛋白的亚细胞定位.将黏菌素作用于PC12细胞12h或24h,采用免疫印迹法检测细胞自噬和凋亡的相关蛋白表达量变化,结合形态学变化和一系列生化指标改变,分析并探讨p53基因沉默及过表达在黏菌素诱导自噬过程中的调控机制;再分别使用100nM溶酶体抑制剂(BFA)和5mM自噬抑制剂(3-MA)分别将细胞做预处理,采用上述方法,分析和评定p53基因表达量变化对自噬功能的影响.
结果：结果显示p53siRNA和pcDNA3.1+p53能有效地沉默和过表达细胞质中的p53基因.在黏菌素诱导的p53基因沉默组PC12细胞中,12h时间点自噬相关基因和蛋白表达量明显降低(p＜0.01),LC3免疫荧光点减弱,24h时间点自噬相关基因和蛋白表达量显著增加(p＜0.01),LC3免疫荧光点增加,电镜下观察自噬小体增多;预处理BFA组自噬通量指标无显著变化,3-MA组凋亡相关活性蛋白表达量显著降低(p＜0.01),细胞核固缩、偏移现象减少;在黏菌素诱导的p53基因过表达组PC12细胞中,自噬相关基因和蛋白表达量明显降低(p＜0.01)并呈现时间依赖性,LC3免疫荧光点减弱;凋亡相关活性蛋白及基因的表达量显著降低(p＜0.01),细胞核固缩、偏移现象明显.
结论：p53蛋白沉默使得黏菌素诱导的PC12细胞自噬现象在12h时下调、24h上调,并且上调的自噬促进黏菌素诱导的细胞凋亡;p53蛋白的过表达抑制黏菌素诱导的自噬并加速了细胞凋亡现象的发生.
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