【摘 要】
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通过真空渗入法获得了转抗虫基因pinⅡ的不结球白菜.各独立转化株系在温室经自交后,对自交一代(T2代)进行了小菜蛾连续饲喂实验,并利用标记基因bar介导的除草剂Basta抗性进行了自交一代(T2)及二代(T3)中外源基因的遗传分离情况分析.结果表明获得的转pinⅡ基因白菜一些株系具有明显的抗虫效果,主要表现在影响小菜蛾的虫体发育,降低虫体体重,提高死亡率和降低虫体的化蛹率、羽化率等方面.通过除草剂
【机 构】
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国家蔬菜工程技术研究中心(北京) 山东农业大学(泰安)
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通过真空渗入法获得了转抗虫基因pinⅡ的不结球白菜.各独立转化株系在温室经自交后,对自交一代(T2代)进行了小菜蛾连续饲喂实验,并利用标记基因bar介导的除草剂Basta抗性进行了自交一代(T2)及二代(T3)中外源基因的遗传分离情况分析.结果表明获得的转pinⅡ基因白菜一些株系具有明显的抗虫效果,主要表现在影响小菜蛾的虫体发育,降低虫体体重,提高死亡率和降低虫体的化蛹率、羽化率等方面.通过除草剂抗性筛选,证明了外源基因的插入主要为单拷贝及二个独立拷贝不连锁插入形式,分离比符合孟德尔遗传规律,也有个别特殊的分离比;基因的分离比在T2、T3代中吻合,表明外源基因能够稳定遗传.在T3代获得了纯合转基因株系.
其他文献
本文通过用保守的特异引物进行PCR扩增,并结合RACE技术,从大白菜品种黄芽14,萝卜品种圆白和诸葛菜三个材料中扩增到三个完整的cDNA全长,分别命名为BCCYP86MF,RSCYP86MF和OVCYP86MF.这三个基因cDNA全长分别为1854bp,1818bp,1876bp,分别编码524,526,534个氨基酸.将所推导的氨基酸序列与从数据库中得到的已知基因进行排序,发现它们与拟南芥CYP
本研究在获得花粉不能正常萌发的CYP86MF反义基因转化植株的基础上,比较了它们与正常对照株之间的相关生理生化指标的差异,结果表明,上海青白菜转化株叶片和花蕾的GA含量比对照株低31.66﹪和62.88﹪;而油青菜心的对照株叶片和花蕾的ZT含量分别比转化株高64.49﹪和51.09﹪.相反,转基因植株的ABA含量显著高于其阴性对照植株.同时,上海青白菜和油青菜心的转化株叶片及花蕾与对照株在呼吸速率
通过Genbank中登记的胞质雄性不育相关基因atp6基因序列保守区,设计了特异引物,经过RT-PCR扩增,获得了不结球白菜胞质不育相关基因atp6基因的cDNA部分序列,BLAST分析发现不结球白菜atp6基因与已报道的atp6基因的同源性高达98﹪.说明已成功克隆到atp6基因的cDNA片段,该片段在Genbank中的登录号为AY628692和AY623004.
利用cDNA-AFLP技术,以A18和T16引物为引物对,对矮脚黄白菜(Brassica campestris L.ssp.chinensis Makino var.communis Tsen et Lee cv.Aijiaohuang)雄性不育两系不育株系与可育株系的表达差异进行分析,结果在可育中蕾和可育大蕾中特异表达的差异条带一条,且可育大蕾表达量强于可育中蕾;可育系连莲座期叶,开花期叶、花茎
根据GenBank中登录的拟南芥WRKY转录因子的保守序列设计引物,采用RT-PCR和3-RACE方法,从SA处理的不结球白菜抗病自交系苏州青中,获得了473bp的DNA片段.序列分析表明,该序列含有WRKY转录因子共有的WRKYGQK保守结构域,与拟南芥AtWRKY18氨基酸序列的同源性为83﹪,与拟南芥AtWRKY60同源性为72﹪,表明已经成功克隆了不结球白菜WRKY1基因3末端cDNA序列
根据从Pentadiplandra brazzeana Baillon中分离获得的Brazzein甜蛋白基因的氨基酸序列,人工合成了全长168bp(含有转录起始位点ATG以及终止子TAA)Brazzein甜蛋白基因,并克隆至pMD18-Teasy vector上.测序结果表明所获得的基因与Brazzein甜蛋白基因序列完全相符;同时从番茄中克隆果实特异表达启动子pE8,构建番茄果实特异表达载体pB
对不结球白菜细胞质雄性不育系及其保持系DNA进行RAPD分析,在其不育系中获得了两条稳定扩增的片段OPAX1和OPAF12,序列测定结果证明OPAX1DNA序列全长为773bp,其碱基组成为A+T=54.20﹪,A+G=42.69﹪.序列中含有多个起始和终止密码子,推断可以编码含9~74个氨基酸残基的9个多肽片段.通过序列查询发现它与已报道序列的同源性均很低,表明该片段为新发现的不结球白菜DNA序
采用RT-PCR方法,从甜瓜果实总RNA中扩增出目标cDNA片段(MAI),在GenBank中登记号为AF490425.将该基因片段定向插入到pPOK2的BamH Ⅰ/Sma Ⅰ克隆位点,构建了Anti-MAI植物表达双元载体,在根癌农杆菌介导下转化烟草,经PCR和PCR-Southern杂交检测,证明此基因已整合入烟草的核基因组中.
采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将葡聚糖酶和几丁质酶基因共同导入西瓜(Citrullus lanatus)子叶外植体,经抗性筛选和组织培养获得再生植株.通过对转基因植株中插入序列的GUS染色鉴定和特异引物PCR检测,表明葡聚糖酶和几丁质酶基因已成功导入西瓜植株.
采用正交试验设计的方法,建立了西瓜RAPD分析的优化反应体系,在此基础上,对西瓜核雄性不育G17AB系进行了RAPD分析,筛选到了一个与西瓜育性基因连锁的RAPD标记A12,与育性基因之间遗传距离为8.1cM.