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目的:探讨维拉帕米对瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloid Fibroblasts,KFB)增殖的作用。方法:1、材料:体外培养3—5代以内的6例瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)及3例正常皮肤成纤维细胞(NFB)。2、实验方法(1)测定维拉帕米对成纤维细胞的药物毒性作用将第3—8代指数生长期KFB和NFB培养至80—90%细胞融合;弃上清液,加入含0.5%新生牛血清DMEM培养液,内含维拉帕米10-3 M、10-4M 10-3M、10-6M、10-7M每种药物浓度2孔,阴性对照1孔,继续培养72h;用O.25%胰蛋白酶将各孔成纤维细胞消化,制成细胞悬液,用0.4%台盼蓝染色,观察死、活细胞数,照像。(2)荧光闪烁细胞计数法和3H-TdR掺入法测定维拉帕米作用的不同时间对KFB和NFB增殖的影响。(3)用I%=(阴性对照组CPM值-实验组CPM值)/阴性对照CPM值公式计算药物对成纤维细胞增殖抑制率;用Prizm软件绘制药物对成纤维细胞增殖抑制作用曲线,确定各药物的IC50值。3、统计方法用Microsoft Excel和Prizm软件对所得数据进行计算均数和标准差。用Spss统计软件ANOVA和LSD检验方法对所得数据进行检验,设定p<0.05为差异具有显著性。结果:1、维拉帕米对KFB和NFB毒性作用检测:各种浓度的维拉帕米作用72h后,用台盼蓝染色法检测发现,KFB和NFB细胞存活率在99%以上。2、不同浓度维拉帕米对KFB和NFB增殖抑制作用的时间效应:不同浓度维拉帕米均使KFB和NFB增殖受到不同程度的抑制,其IC50值为1.022×10-6M。不同浓度的药物抑制KFB增殖的IC50值均大于正常皮肤(P<0.05)。3、不同浓度维拉帕米对KFB和NFB增殖抑制作用的时间效应:未加药物处理的KFB和NFB在接种6h和12h开始增殖,24h后达到高峰,48h后又逐渐恢复至静止状态。4、维拉帕米作用6、12h时药物对KFB和NFB的增殖抑制作用逐渐增强,到24h时达到高峰,48h时抑制作用逐渐消失。结论:各种浓度的维拉帕米对KFB和NFB增殖均有抑制作用,对KFB的抑制大于NFB,其抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性。