论文部分内容阅读
目的系统研究灵芝的化学成分,发现新的三萜类成分,筛选抗肿瘤及逆转耐药作用的活性成分,并探讨三萜类成分对诱导细胞凋亡的影响。方法采用常规硅胶柱色谱结合葡聚糖凝胶色谱及制备型高效液相色谱对灵芝进行系统的分离纯化研究;通过波谱解析及化学方法等手段对所得单体化合物进行结构鉴定;利用MTT法分别检测灵芝化学成分的抗肿瘤活性、耐药性以及逆转效果;流式细胞术检测三萜类成分对诱导细胞凋亡的影响。结果 1、从灵芝中分离得到3个新化合物,分别为化合物7、14、17,以及14个已知化合物,分别为Ergosterol（1）、ganoderol B（2）、Ganodermanontriol（3）、ganoderic acid S 1（4）、Ergosterol peroxide（5）、ergosta-7,22-dien-3β-ol（6）、7-oxo-ganodefic acid Z（8）、ganodermatriol（9）、ganoderiol F（10）、ganodermanondiol（11）、ganoderone A（12）、lucialdehyde C（13）、ganodenc acid DM（15）、5α-1anosta-7,9（11）,24-triene-15α,26-dihydroxy-3-one（16）。还有1个因得量少而未进行结构鉴定的化合物,命名为化合物18。2、作用48h后,Compd.11对K562细胞生长具有较强的抑制作用,其IC50为2.56μg/ml;化合物5、9、10、11、16、18能显著抑制HL-60细胞的增殖,其IC50分别为2.8μg/ml、4.32μg/ml、2.93μg/ml、3.55μg/ml、1.92μg/ml、2.15μg/ml;MDA-MB-453、BT474、KBv200细胞对大部分受试药物不敏感,唯有Compd.18作用效果较显著,其IC50分别为2.71μg/ml、10.13μg/ml、6.26μg/ml。;SW-620细胞对化合物17、18尤为敏感,其IC50分别为3.71μg/ml、2.75μg/ml;化合物11、18对HCT-116细胞生长抑制较明显,其IC50分别为4.96μg/ml、11.03μg/ml。EC-9706、KB、OE-19细胞对受试药物不敏感。3、AnnexinV-FITC联合PI染色法显示,浓度为2.5μg/ml和10μg/ml的Compd.13作用于K562癌细胞48小时后,凋亡率随着灵芝三萜浓度的增加有增加趋势,而化合物11、15、8三种化合物对细胞凋亡影响不大。4、在低于IC10值的浓度下,分别测试各化合物联合阿霉素逆转肿瘤耐药作用。作用于耐药细胞株KBv200细胞48h后,化合物2、8、10、11、12与ganoderiol B在10ug/ml浓度下的逆转倍数分别为6.58、4.91、7.05、4.01、4.71与3.42;在10μg/ml与5μg/ml浓度下,化合物17、7的逆转倍数分别为11.12、5.25,13.27、5.96;Compd.3在5μg/ml浓度下的逆转倍数为3.23;Compd.9在2.51μg/ml浓度下的逆转倍数为3.97。作用于耐药细胞株K562/A02细胞48h后,Ganoderiol B在10μg/ml浓度下的逆转倍数为5.53;在10ug/ml与5ug/ml浓度下,Compd.17的逆转倍数分别为15.75、7.36;Compd.16在2.5ug/ml浓度下的逆转倍数为16.37。结论灵芝三萜类化合物对多种肿瘤细胞具有一定的抗肿瘤活性,对耐药细胞株K562/A02、KBv200增殖抑制作用弱,其中Compd.18对上述大部分肿瘤细胞生长均具有显著的抑制作用,同时对耐药细胞有较强的细胞毒作用,这表明其可作为一种有潜力的抗癌药物;灵芝三萜诱导细胞凋亡的主要有效成分是中性部位;灵芝化学成分具有提高多药耐药性肿瘤细胞K562/A02、KBv200对阿霉素敏感性的潜在活性,特别是两新化合物——化合物7、17。