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金鸡菊查耳酮(Okanin),分子式C15H12O6,分子量288.25,属查耳酮类化合物,主要来源于菊科金鸡菊属和鬼针草属植物.其苷形式为马里苷(Marein).在中国和韩国等地民间广泛用于疼痛及炎症的治疗.已有报道发现金鸡菊查耳酮能通过抑制一氧化氮合酶的表达从而抑制炎症的发生.然而关于其与炎症重要通路NF-kB信号通路之间的关系及其具体机制还未见报道.双荧光素酶报告基因系统是分别以海肾荧光素和萤火虫荧光素为底物来检测海肾荧光素酶和萤火虫荧光素酶活性的一种报告系统.本课题通过双荧光素酶报告基因系统对多种化合物进行筛选.双荧光素酶报告基因系统是分别以海肾荧光素和萤火虫荧光素为底物来检测海肾荧光素酶和萤火虫荧光素酶活性的一种报告系统。本课题通过双荧光素酶报告基因系统对多种化合物进行筛选。体外培养稳定转染NF-κB启动的荧光素酶报告基因的人胚肾细胞HEK293T细胞以及C6细胞(稳定表达IL-1β受体)，给予金鸡菊查耳酮(10>20或40μM)预处理后，分别采用TNF-α或IL-1β刺激，利用双荧光素酶报告基因系统检测NF-κB信号通路激活情况，从而观察药物对NF-κB抑制作用;采用体外cell free system重建NF-κB信号通路，分别给予金鸡菊查耳酮(20,40,80,160,320或640μM)预处理后，再加入阳性刺激蛋白TRAF6,Western blotting检测IxBa的磷酸化。结果表明，p-IκBa随药物浓度增加而减少，表明金鸡菊查耳酮能通过抑制IKK活性从而抑制NF-κB信号通路的激活。