【摘 要】
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本研究克隆了一株鸡源AIV H5N1亚型PQ分离株的HA基因,并对其进行了序列分析.结果表明HA开放阅读框内含有1707个碱基,编码568个氨基酸,其中HA1 330个氨基酸,HA2 222个氨基酸.HA基因与HK156/97、GD1/96)和HKYU822.2/01的核苷酸和氨基酸同源性分别为96.3％、96.1％、98.2％和96％、97.4％、98.4％,糖基化位点和受体结合位点均变化不大.
【机 构】
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西南民族大学,成都,610041;河南省畜牧兽医总站,郑州,450002 青岛易邦公司,青岛,26
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会
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本研究克隆了一株鸡源AIV H5N1亚型PQ分离株的HA基因,并对其进行了序列分析.结果表明HA开放阅读框内含有1707个碱基,编码568个氨基酸,其中HA1 330个氨基酸,HA2 222个氨基酸.HA基因与HK156/97、GD1/96)和HKYU822.2/01的核苷酸和氨基酸同源性分别为96.3％、96.1％、98.2％和96％、97.4％、98.4％,糖基化位点和受体结合位点均变化不大.裂解位点具有多个碱性氨基酸(RERRRKKR),与其它三个HPAIV完全一致.将HA基因定向亚克隆人杆状病毒Bac-to-Bac系统的转移载体pFastBacDual中,经酶切和PCR鉴定为阳性的重组转移载体再转化进入含有杆粒和辅助质粒的DH10BacTM菌中,与杆粒DNA在细菌内进行同源重组.以M13为引物,用PCR方法鉴定重组杆粒DNA,结果证明成功构建了表达HA基因的重组杆状病毒表达载体.
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本实验利用禽流感重组核蛋白作为包被抗原,建立了检测鸭血清禽流感抗体的间接ELISA方法,通过对各个工作组份反应条件的优化,确定的最佳工作条件为:包被抗原1∶300稀释(蛋白含量为8μg/mL);待检血清1∶200稀释;酶标抗体1∶7000稀释;封闭时间、待检血清和酶标二抗最佳作用时间均为1.5h.通过对907份鸭血清样本(包括141份免疫血清和766份现地血清)进行检测,经符合实验(AGP和HI)
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