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小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)是大麦黄花叶病毒属(Bymovirus)成员,由禾谷多黏菌(Polymyxa graminis)传播。小麦播种后禾谷多黏菌开始侵染,一般情况下,返青期出现明显的黄色花叶症状,气候特别适合的年份,越冬前即可出现明显症状。感病小麦分蘖减少,成熟期穗短小,秕子多,部分小穗死亡,造成不同程度的产量损失,一般病田小麦减产10%～30%,重病田减产可高达50%～70%,甚至绝收。小麦黄花叶病已经成为我国冬麦区危害最重的病毒病。小麦黄花叶病毒基因组有两条正义RNA单链组成,RNA1编码1个分子量为269kDa的多聚蛋白,经蛋白酶切割后生成8个成熟蛋白,从N端到C端依次为P3、7K、CI、14K、Nla-VPg、NIa-Pro、NIb和CP。RNA2编码1个分子量为101kDa的多聚蛋白,经蛋白酶切割后生成P1和P2两个成熟蛋白。为了探索小麦黄花叶病毒CI、NIa、NIb在病毒与寄主互作过程中的功能。利用RT-PCR分别克隆了CI、NIa-pro、NIb的序列,构建了诱饵载体pGBKT-CI、pGBKT-NIa、pGBKTNIb,转化Y2H GOLD酵母感受态细胞,涂布在SD/-Trp与空质粒对照比较生长情况验证3个重组质粒无毒性;涂布SD/-rrp/-Leu/-Ade/-His/ABA/X-α-GAL平板上,3个重组质粒转化酵母菌株不能正常生长,确定诱饵载体在酵母中无自激活活性。将含有小麦cDNA文库的酵母Y187,分别与3种诱饵载体转化的Y2H GOLD进行有性杂交,筛选与CI、NIa-Pro、NIb互作的寄主因子,再通过共转验证。验证互作的质粒,测序正确的序列在GenBank中进行Blast分析。筛到与NIa互作的6个不同小麦基因片段,通过比对发现,多个生物代谢过程中的重要酶可能与NIa-Pro存在互作,如天冬氨酸蛋白酶、甘氨酸脱氢酶、谷氨酰胺亚基转移酶等。筛到与NIb互作的6个不同小麦基因片段,包括谷胱甘肽S-转移酶GSTs(gultathione S transferases GSTs)等。筛选与CI互作的4个不同小麦基因片段,包括小麦扩展蛋白,小麦类金属硫蛋白等。通过酵母双杂交技术,筛选到多个与小麦黄花叶病毒CI、NIa-pro、NIb互作的重要寄主小麦蛋白,而且发现多个蛋白参与小麦的抗病(逆)生物代谢途径,为研究WYMV侵染机制以及寄主抗病机制提供了理论基础。