【摘 要】
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目的 细胞周期是指以有丝分裂方式进行增殖的细胞从一次分裂完成时开始到下一次分裂完成时为止所经历的全过程.通常由G1期、S期、G2期和M期组成.当前研究表明,细胞周期紊乱是人类恶性肿瘤的共同特征,临床上使用的许多抗肿瘤药物,作用靶点也是针对控制细胞周期的关键蛋白.cyclin E 在 G1 期表达,S 期降解,Skp2的表达水平在G0/G1 期非常低,而在S期表达增加.光学分子影像技术是应用光学成像
【机 构】
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汕头大学医学院 汕头大学医学院附属肿瘤医院
【出 处】
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中华放射学学术大会2016、中华医学会第23次全国放射学学术大会暨中华医学会第24次全国影像技术学术大会
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目的 细胞周期是指以有丝分裂方式进行增殖的细胞从一次分裂完成时开始到下一次分裂完成时为止所经历的全过程.通常由G1期、S期、G2期和M期组成.当前研究表明,细胞周期紊乱是人类恶性肿瘤的共同特征,临床上使用的许多抗肿瘤药物,作用靶点也是针对控制细胞周期的关键蛋白.cyclin E 在 G1 期表达,S 期降解,Skp2的表达水平在G0/G1 期非常低,而在S期表达增加.光学分子影像技术是应用光学成像在分子或细胞水平上研究活体状态下的生理,本研究将细胞周期特异蛋白cyclin E 和Skp2与萤火虫荧光素酶融合,构建细胞周期G1期和S期特异性光学分子报告基因,通过分子影像学及生物发光成像技术,监测抗肿瘤药物将细胞阻滞在不同的细胞周期如G1期或S期,为在体、实时、无创的检测细胞周期的改变提供较好的模型. 方法 cyclin E蛋白和Skp2蛋白表达具有依赖细胞周期变化而波动的特性,我们利用荧光素酶基因可以应用于活体进行成像的特点,应用融合蛋白构建技术构建cyclin E-luc2和Skp2-luc2基因真核表达载体,通过筛选稳定表达两个融合蛋白的Hela肿瘤细胞株,挑取荧光素酶活性较高的单克隆.使用动物活体成像的技术检测cyclin E-luc2和Skp2-luc2是否可以在体监测细胞周期的变化；采用流式细胞术的方法检测抗肿瘤新药Palbociclib (PD0332991)刺激2株单克隆细胞株后,细胞周期G1期或S期的变化与成像系统所监测到的荧光素酶活性的变化是否一致. 结果 cyclin E-luc2和Skp2-luc2的表达水平均随细胞周期变化而变化,分别在 G1 期和S期达到最高点.细胞在Palbociclib抗肿瘤药处理后出现明显的G1期阻滞.药物处理24h后,cyclin E-luc2单克隆细胞株荧光素酶活性于明显上升了4倍, 而Skp2-luc2单克隆细胞株荧光素酶活性上升约2倍. 结论 成功构建了细胞周期G1期和S期特异性光学分子报告基因cyclin E-luc2和Skp2-luc2,二者表达具有细胞周期特异性,cyclin E-luc2在G1期高表达,进入S期后迅速降解,Skp2-luc2在G1期表达较低,进入S期表达升高.两报告基因可以用于G1期和 S期抗肿瘤药物阻滞细胞周期的监测,及细胞周期与相关信号通路的研究.
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