引言/目的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)可引起牛高热、上呼吸道及气管发炎、繁殖障碍等多种症状。在过分拥挤、封闭式环境中,IBRV可通过空气传播,对牛群肥育率、产奶量和繁殖影响极大。因此,亟待建立牛场IBRV气溶胶的检测技术,为IBRV的流行病学调查及切断气溶胶传播途径的防控策略提供技术支持。材料与方法结合本实验室分离获得的IBRV和Genbank中的病毒全基因组序列,针对gD基因的保守区域,设计多对特异性引物,最终选择一对引物建立了IBRV实时荧光定量PCR检测方法,并应用冲击式采样器收集养殖场不同环境中的病毒气溶胶样本,富集病毒气溶胶样本,提取基因组DNA,并进行特异性、敏感性、重复性的检测。利用建立的方法对牛舍气溶胶样本进行IBRV检测。结果与讨论建立了IBRV实时荧光定量PCR检测方法,该方法在1.7×10~0-1.7×10~6拷贝/μL内有良好的线性关系,其相关系数为0.998;利用10倍稀释法检出灵敏度达1.7×10~0拷贝/μL,比常规PCR检测方法高10倍;该方法与牛病毒性腹泻病毒、牛副流感3型病毒、牛冠状病毒、牛轮状病毒均无交叉反应,具有较好的特异性;应用该诊断方法检测了35份临床血清样本,抗体阳性率为22.9%(8/35),检出阳性率较传统PCR方法高11%。说明所建立的荧光定量PCR方法特异性好,灵敏度高,稳定可靠。与传统PCR方法相比,实时定量PCR最大的优点是能实时监测反应早期到终点过程中PCR的扩增情况,同时还具有敏感性高、需要样品量少、特异性优良、能精确定量等特点。荧光定量PCR方法,对引物设计要求较高,操作时需要在冰上操作,否则引物二聚体及非特异性扩增会严重干扰结果的准确性。因此,需要合理设计引物,优化反应体系和反应条件。结论成功建立了IBRV实时荧光定量PCR检测方法,可应用于IBRV病毒气溶胶的实时监测,为牛场IBRV的监测与评估提供了有力的技术支持。