【摘 要】
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目的：进一步测定殊异韦荣菌中依赖性乳酸脱氢酶(LDH)的活性,以期为研究该酶的具体功能及作用机制奠定基础,并为龋病预防和治疗提供新的思路.方法：重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中,采用不同时间及6种不同浓度的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTC)诱导乳酸脱氢酶蛋白表达,选择最佳条件诱导LDH蛋白表达.并经His-标记蛋白纯化柱(HisTRAP FF柱)提纯,用LD
【机 构】
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130021 长春,吉林大学口腔医学院牙体牙髓科;吉林大学中日联谊医院口腔科,长春,130033
【出 处】
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中华口腔医学会第14次全国口腔医学学术会议
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目的：进一步测定殊异韦荣菌中依赖性乳酸脱氢酶(LDH)的活性,以期为研究该酶的具体功能及作用机制奠定基础,并为龋病预防和治疗提供新的思路.方法：重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中,采用不同时间及6种不同浓度的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTC)诱导乳酸脱氢酶蛋白表达,选择最佳条件诱导LDH蛋白表达.并经His-标记蛋白纯化柱(HisTRAP FF柱)提纯,用LDH活性试剂盒测定蛋白活性.结果 ：pET-28a-LDH转入BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示最适表达条件分别为IPTG终浓度0.4mmoL/L、30℃诱导8h,IPTG终浓度0.4mmol/L、30℃诱导6h.经BandScan 5.0软件分析,pET-28a-LDH质粒转化BL21(DE3)表达相对含量为9.0％,高于Rosetta(DE3)的6.1％;LDH活性试剂盒测定的蛋白活性值为13.79.结论：本项研究获得了LDH蛋白的最适诱导条件,并测出殊异韦荣菌中依赖性LDH的活性,为进一步研究LDH的功能及在龋病防治中的作用奠定了基础.
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