【摘 要】
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目的 比较三种不同血清型腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的绿色荧光蛋白对西藏小型猪胚胎成纤维细胞(Porcine fetal fibroblast,PFF)的转染效率.方法 原代
【机 构】
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南方医科大学实验动物中心,广州510515南方医科大学生物技术学院,广州510515
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目的 比较三种不同血清型腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的绿色荧光蛋白对西藏小型猪胚胎成纤维细胞(Porcine fetal fibroblast,PFF)的转染效率.方法 原代分离培养西藏小型猪胚胎成纤维细胞并进行形态学鉴定,按照感染复数(multiple of infection,MOI)为103,104,105,,转染传代两次的猪胚胎成纤维细胞,流式细胞学检测不同血清型AAV对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的转染效率,并在倒置显微镜下观察转然后,绿色荧光的表达强度;同时,应用MTT方法检测不同血清型的AAV对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的毒性.结果 腺相关病毒AAV2-EGFP对PFF的转染效率随MOI值的增加而增高,MOI=103时,转染效率为(33.68±1.18)%,当MOI值达到104时,转染效率稳定在(50.80±2.59)%,随着MOI值的增加,当达到105,时,转染效率为(60.08±1.08)%,而其他两种血清型病毒感染效率均低于AAV2-EGFP,在MOI=105时,转染效率分别为AAV8=(8.3±0.02)%,AAV9=(2.20±1.02)%.3种病毒转染PFF的过程中,细胞生长正常,MTT显示各个转染组与对照组(未转染组)在OD570处,吸光度无显著差异.结论 AAV2血清型载体对体外培养的猪胚胎成纤维细胞(PFF)的感染效率显著高于其他几种血清型,AAV8和AAV9对PFF感染能力极差,筛选AAV2作为西藏小型猪基因打靶的最适病毒载体;同时,3类血清型病毒载体对猪胚胎成纤维细胞,均无明显细胞毒性.
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