【摘 要】
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本研究根据哺乳动物细胞真核表达载体pIRES MCSA MCSB多克隆位点的序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5ORF6基因阅读框架,并在基因起始密码子前面加入Kozak序列,分别设计了针对ORF5ORF6的引物P5s/P5r,P6s/P6r。以病毒细胞培养物为模板,经RT-PCR扩增得到ORF5ORF6基因,ORF5ORF6PCR产物和pIRES分别经双酶切,连接构建pIRES-ORF5ORF6
【机 构】
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山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南,250100 山东省农业科学家禽研究所,济南,250100
【出 处】
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山东畜牧兽医学会养猪专业委员会第一届学术研讨会
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本研究根据哺乳动物细胞真核表达载体pIRES MCSA MCSB多克隆位点的序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5ORF6基因阅读框架,并在基因起始密码子前面加入Kozak序列,分别设计了针对ORF5ORF6的引物P5s/P5r,P6s/P6r。以病毒细胞培养物为模板,经RT-PCR扩增得到ORF5ORF6基因,ORF5ORF6PCR产物和pIRES分别经双酶切,连接构建pIRES-ORF5ORF6.经PCR、双酶切鉴定和测序证明成功构建了转移载体pIRES-ORF5ORF6.测得的ORFSORF6序列与VR-2332株的氨基酸同源性分别为99％和100％,仍属北美洲型。构建成功的转移栽体pIRES-ORF5ORF6可作为防治PRRS的核酸疫苗,并可作为转移栽体在哺乳动物细胞中同时翻译表达两个蛋白,为进一步为PRRS的防治提供亚单位疫苗打下基础。
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