【摘 要】
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目的：利用载体系统表达小发夹RNA(small hairpin RNA，shRNA)，诱导RNA干扰(RNAinterference，RNAi)为抗病毒研究提供一种新的方法。方法：构建含乙肝表面抗原和绿荧光蛋白(HBs-GFP)融合基因的载体和表达小发夹RNA(shRNA)的载体，共转染到HepG2细胞中，流式细胞仪检测融合基因的绿荧光表达情况，同时用荧光定量RT-PCR检测其RNA水平的改变；选
【机 构】
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浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所,浙江省杭州市,中国
【出 处】
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首届长三角科技论坛：长三角生物医药发展论坛
论文部分内容阅读
目的：利用载体系统表达小发夹RNA(small hairpin RNA，shRNA)，诱导RNA干扰(RNAinterference，RNAi)为抗病毒研究提供一种新的方法。
方法：构建含乙肝表面抗原和绿荧光蛋白(HBs-GFP)融合基因的载体和表达小发夹RNA(shRNA)的载体，共转染到HepG2细胞中，流式细胞仪检测融合基因的绿荧光表达情况，同时用荧光定量RT-PCR检测其RNA水平的改变；选择有效的shRNA表达载体，转染HepG2.2.15细胞系。放射免疫法检测上清中HBsAg和HbeAg的分泌情况。
结果：流式细胞仪检测发现针对HBsAg的shRNA抑制绿荧光蛋白的表达，抑制率较空载体对照组下降56％，荧光定量RT-PCR检测结果显示，其mRNA水平降低明显，抑制率较空载体下降90％。转染HepG2.2.15细胞系后，HBsAg and HBeAg分别下降了43％and 64％。
结论：小发夹RNA可以有效抑制HBVS基因的表达，同时建立一种可行的筛选RNAi作用靶位的方法。
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