【摘 要】
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1951年McClintock在玉米的遗传研究中,首先提出转座子的概念.在早期研究中,玉米突变体内发现En/Spm转座元件,Spm编码的两种蛋白TnpA(68KDa)和TnpD(131KDa),分别为DNA结合蛋白和内切酶,在转座中起到重要的作用.而在目前大豆转座子研究中,Tgm9是最早发现的具有转座活性的内源性转座子,隶属于cacta型的DNA转座子,在结构上和玉米En/Spm相近.在大豆体内T
【机 构】
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陕西省生物技术重点实验室/西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室/西北大学生命科学学院,陕西西安710069
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1951年McClintock在玉米的遗传研究中,首先提出转座子的概念.在早期研究中,玉米突变体内发现En/Spm转座元件,Spm编码的两种蛋白TnpA(68KDa)和TnpD(131KDa),分别为DNA结合蛋白和内切酶,在转座中起到重要的作用.而在目前大豆转座子研究中,Tgm9是最早发现的具有转座活性的内源性转座子,隶属于cacta型的DNA转座子,在结构上和玉米En/Spm相近.在大豆体内Tgm9是低拷贝转座子元件,全长约为20.5kb,包括5TIR(Terminal Inverted Repeat)、3TIR以及中间的DNA序列,DNA序列有两个开放课阅读框ORF1、ORF2可编码蛋白GmTNP2和GmTNP1,通过序列比对,GmTnp1与TnpA具有同源性,是GmTnp2与TnpD具有同源性,推测GmTNP2和GmTNP1分别与大豆中TNPD和TNPA功能相似.本研究首先通过将GmTNP2和GmTNP1分别与GFP蛋白融合,进行这两种转座酶亚细胞定位；其次通过酵母双杂交研究TNP1与TNP2、TNP1和TNP1以及TNP2和TNP2之间是否具有相互作用；为了进一步研究TNP1与TNP2的关系,不断优化蛋白诱导条件,诱导出可溶性蛋白TNP1和TNP2,可进行pulldown实验以研究GmTNP1和GmTNP2之间相互作用；最后通过EMSA实验探究GmTNP1和GmTNP2与核算序列的关系,从而研究大豆体内Tgm9的转座机制.
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