【摘 要】
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目的:1)证实小鼠缺血性脑卒中后小胶质细胞与T细胞之间存在相互作用;2)证明小胶质细胞可通过sFasL趋化T细胞进入梗死灶,产生相互作用,一起参与脑免疫炎症.方法:制备小鼠MCAO模型,并提取造模后不同时间点(6h,12h,24h,3d,7d)的脾脏T细胞与BV2小胶质细胞系共培养,从形态学、RNA及蛋白水平检测两种细胞的形态变化及炎症因子表达水平变化;用LPS/OGD刺激小胶质细胞,使用Elis
【机 构】
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南京大学附属鼓楼医院 210008
【出 处】
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中华医学会第十六次全国神经病学学术会议
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目的:1)证实小鼠缺血性脑卒中后小胶质细胞与T细胞之间存在相互作用;2)证明小胶质细胞可通过sFasL趋化T细胞进入梗死灶,产生相互作用,一起参与脑免疫炎症.方法:制备小鼠MCAO模型,并提取造模后不同时间点(6h,12h,24h,3d,7d)的脾脏T细胞与BV2小胶质细胞系共培养,从形态学、RNA及蛋白水平检测两种细胞的形态变化及炎症因子表达水平变化;用LPS/OGD刺激小胶质细胞,使用Elisa方法检测其上清中sFasL浓度是否升高;采用Transwell系统,探索sFasL是否对T细胞具有趋化作用,进一步采用Transwell方法进行小胶质细胞与T细胞共培养,前者种于下室,后者种于上室,并于下室加入FasL中和抗体,在LPS/OGD作用下探索小胶质对T细胞的趋化作用是否减弱,并比较sFasL与其他趋化因子作用的强弱;在体水平上,引进Gld(FasL点突变)转基因小鼠以及EGFP(绿色荧光蛋白表达)转基因小鼠,首先采用免疫荧光探索Gld/B6鼠在造模后小胶质细胞周围T细胞的表达情况,进一步将从EGFP小鼠提取的T细胞通过尾静脉注射至造模后的B6/Gld小鼠中进行示踪,探索Gld鼠卒中后进入梗死灶的T细胞是否减少,并从行为学、TTC等方面评估小鼠卒中情况.结果:小胶质细胞与T细胞共培养后存在Crosstalk,形态学表现为T细胞聚集在小胶质细胞周围,随着造模后时间点延长,炎症因子(IL-1 β、IL-6、IL-10等)表达水平均亦升高.LPS/OGD作用下,小胶质细胞表达的sFasL浓度升高.Transwell结果表明,BV2可趋化T细胞进入下室,且sFasL对T细胞具有趋化作用,加入FasL中和抗体后,BV2对T细胞的趋化作用减弱;免疫荧光结果表明,Gld小鼠中小胶质周围T细胞聚集减少,且T细胞示踪结果提示造模后Gld小鼠脑中的T细胞减少,且TTC结果示Gld小鼠梗死体积减少,表明小鼠卒中后小胶质细胞可通过sFasL趋化T细胞进入梗死灶,参与脑免疫炎症,加重脑损伤.结论:体内外研究均表明小鼠缺血性脑卒中后小胶质细胞通过sFasL趋化T细胞进入颅内并与其发挥相互作用.
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