【摘 要】
：
本研究通过生物信息学方法分析NDVxx08 株基因组特征,选取HN蛋白主要抗原区设计引物,利用PCR技术扩增出HN 片段主要抗原区(Ile175-Lys367),将该基因片段克隆于pMD18-T-simple载体,构建重组克隆载体pMD-HIle NLys,鉴定并测序后构建HIle NLys 原核重组表达载体pET32-HIleNLys,将其转化至Rosetta(DE3)表达菌株中,对IPTG 浓
【出 处】
：
2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
论文部分内容阅读
本研究通过生物信息学方法分析NDVxx08 株基因组特征,选取HN蛋白主要抗原区设计引物,利用PCR技术扩增出HN 片段主要抗原区(Ile175-Lys367),将该基因片段克隆于pMD18-T-simple载体,构建重组克隆载体pMD-HIle NLys,鉴定并测序后构建HIle NLys 原核重组表达载体pET32-HIleNLys,将其转化至Rosetta(DE3)表达菌株中,对IPTG 浓度、诱导温度、诱导时间进行优化,以确定该蛋白最适表达条件,并通过SDS-PAGE和Western-blot对蛋白产物进行分析和抗原性进行鉴定.以最适诱导条件对HIle NLys表达菌体进行诱导并收集上清，并通过Ni-NTA亲和树脂对目的蛋白进行纯化。利用纯化获得的HIleNLys重组蛋白作为包被抗原，通过优化最适抗原包被浓度、待检血清最适稀释比例，建立NDV血清抗体效价的间接ELISA检测方法。利用本研究所建立的检测方法对40份NDV临床阳性血清、10份NDV临床阴性血清、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性支气管炎病毒和鸡禽流感病毒的标准阳性血清进行检测，并与血凝抑制实验(HI)结果进行比较，确定所建立检测方法的敏感性和特异性。本研究建立的检测新城疫抗体的间接ELISA方法具有简单、快速，特异性强等优点能够用于鸡新城疫抗体水平的快速检测。
其他文献
本文根据在2013年3月10日-12日在上海召开的中国蜂业两会的开展情况进行了分析,笔者在此首先，指出关于蜂业两会时间安排存在的问题及调整的提议；其次，指出参会蜂农的收费问题及改进以及会展期间开设特训班的提议；最后，就蜂农关心的系列问题和蜂业博览会的模式及改进的提议展开了论述。
在经历国际金融危机的出现、国家宏观经济变化和蜂产品行业市场环境的严峻考验下,作为已经有20年历史的"深圳老字号"品牌——始祖神农氏,经过革新思路,转变"蜂产品+蜜蜂产品为原料/概念的化妆品+前店后院"的整店输出经营模式,提升企业的盈利能力并迅速发展,受到消费者和投资者的青睐,开启属于自己的蜂产品连锁经营商业模式.
我国居民近20年营养状况和膳食结构发生了明显变化，慢性病对我国膳食结构提出了挑战，针对我国慢性病干预存在的问题，先后在江苏省南京市、无锡市和徐州市的社区居民中，以防治高血压、高血脂、高血糖等常见慢性病为目标，开展了以粗杂粮干预为抓手的复合式社区慢病干预工作，取得了良好干预效果和很好的社会反应。开展以粗杂粮为抓手的复合式社区慢性病干预，不但简单、安全、经济、有效，可以改善居民膳食结构，而且促进低碳饮
本文对国家杂粮加工技术研发分中心(北京)近五年在杂粮功能成分方面的研究结果综述如下：(1)增强免疫：从藜麦中分离纯化的总皂苷可促进巨噬细胞NO的生成，抑制巨噬细胞的炎症反应，具有免疫调节作用。(2)降血脂：以含2％绿豆的饲料饲喂高血脂模型鼠，可增加模型鼠胆固醇7α-羟化酶的表达，从而降低其血脂水平。
目的:主要通过对WNV-NS1基因重组腺病毒的构建,对西尼罗病毒病的预防进行探索性的研究.方法:pMD18-NS1(AY842931.3)重组质粒由本实验室保存;AdEasyTM Adenoviral Vector System试剂盒(携带腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183 感受态菌)、腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV以及Ad-293细胞由哈尔滨兽医研究所猪病研究室仇化吉
牛结核是由牛分枝杆菌感染引起的疾病,对养牛业乃至人类健康均产生很大的影响.为了研究整个转录组表达的差异,使用AgilentTM公司的牛基因表达谱芯片来研究整个过程中转录组的变化.分别探讨了结核阳性牛的巨噬细胞与结核阴性牛的巨噬细胞的表达谱差异,以及两种感染状态的巨噬细胞在体外牛分枝杆菌攻毒时发生的表达谱改变.在较高的感染复数(MOI等于10)下,观察了巨噬细胞在体外感染前后的基因表达变化,发现体外
目的:研究鸡TOLL样受体3胞外区基因克隆、表达及多克隆抗体的制备。方法:采用Trizol法提取DF-1细胞总RNA,反转录成cDNA,根据GenBank上公布的chTLR3基因序列设计特异性引物,克隆chTLR3胞外区部分基因片段,预计大小为1317 bp,并将其克隆于表达载体pET30a(+)中,经酶切鉴定后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞并进行IPTG诱导表达;用纯化的重组蛋白
为了能够快速、准确定量小鼠Bax基因的mRNA，本实验构建了小鼠Bax基因的标准品质粒和标准曲线。本研究采用SYBR GreenⅠ染料法进行实时荧光定量PCR，由于Ct值相对固定，重复性好，以不同浓度标准品质粒DNA分别进行荧光定量PCR扩增，发现起始浓度越高，Ct值越小，即起始模板浓度与Ct值之间呈良好的线性关系，因此，制定的标准曲线具有很高的线性相关性、敏感性，使得实验结果更精确并具有很高的可
目的:利用重组表达的BTV3-VP2蛋白制备的单克隆抗体,拟建立BTV3型特异性诊断方法。方法:从感染BTV3的BHK-21细胞上清提取病毒RNA,经RT-PCR扩增L2基因,并将该基因分别克隆至原核表达载体pMAL-C4X和真核表达供体质粒pFast-BacHTA载体上。获得的重组质粒分别用于原核和真核表达,从而获得VP2蛋白。以原核表达的重组VP2蛋白作为免疫原免疫5-6周龄BALB/c小鼠,
本实验探讨了鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)发育与宿主细胞凋亡的关系,为鸡球虫病损伤机理的深入研究及防治措施提供基础和理论依据。试验结果表明E.tenella发育早期(24 h以内)抑制宿主细胞凋亡,中后期(24 h～120 h)促进宿主细胞凋亡,且其对感染与非感染细胞均有影响,同时抑制宿主细胞的凋亡有利于E.tenella的发育。在虫体感染早期,E.tenella为了快速生长发育需要一个稳