【摘 要】
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快速有效的检测食品中的致病菌仍然是世界范围内的难题.本研究的目的是建立一种快速检测食品体系中沙门氏菌的方法.检测致病菌常用的方法是使用培养基逐步分离、生化鉴定以及PCR方法.培养基为基础的方法耗时长,通常需要2-3天,PCR方法虽然有较高的灵敏度,但需要专门的技术人员及昂贵的设备.因此,本文建立了一种重组酶扩增结合试纸条快速可视化检测沙门氏菌的方法.根据沙门的invA基因设计了一对特异性引物,分别
【机 构】
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天津科技大学食品营养与安全重点实验室
【出 处】
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2016第五届中国食品安全高峰论坛
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快速有效的检测食品中的致病菌仍然是世界范围内的难题.本研究的目的是建立一种快速检测食品体系中沙门氏菌的方法.检测致病菌常用的方法是使用培养基逐步分离、生化鉴定以及PCR方法.培养基为基础的方法耗时长,通常需要2-3天,PCR方法虽然有较高的灵敏度,但需要专门的技术人员及昂贵的设备.因此,本文建立了一种重组酶扩增结合试纸条快速可视化检测沙门氏菌的方法.根据沙门的invA基因设计了一对特异性引物,分别在5端修饰地高辛和生物素.在目的基因存在的情况下,通过重组酶恒温扩增,可以产生大量的地高辛和生物素标记的双链DNA.这些双链DNA通过免疫反应可以用试纸条进行检测.重组酶结合试纸条可以在15 min内检测食品样品中的沙门氏菌,并且不需要任何仪器,检测限为20 fg DNA或菌体浓度为101 CFU.并且,这种方法与金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,单增李斯特菌,志贺氏菌,产气肠杆菌和空肠弯曲菌等常见致病菌没有交叉反应.在牛奶和鸡胸肉中分别接种100 CFU/mL或100 CFU/g的沙门氏菌,增菌培养2h后用试纸条检测为沙门氏菌阳性样品.在鸡蛋中接种100 CFU/g的沙门氏菌,增菌培养4h后用试纸条检测为沙门氏菌阳性样品.而且,重组酶恒温扩增比PCR简单,并且不需要昂贵的热循环装置,可以用于实际样品的实时检测.
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