苯并芘对小鼠T淋巴细胞的抑制作用及相关信号转导通路的调控

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【目的】苯并芘是一种广泛存在于环境、烟熏和烧烤食品中的多环芳烃类污染物,具有致癌、致突变等多种毒性,对人危害极大。本研究旨在非细胞毒性剂量作用下,研究苯并芘对BALB/c小鼠T淋巴细胞的免疫抑制作用及对相关信号转导通路的调控,为阐明苯并芘的免疫毒性机制,寻找更敏感有效、易检测的毒性生物学标志物提供实验依据。【方法】课题组主要研究苯并芘对BALB/c小鼠T淋巴细胞的免疫抑制作用:分离培养小鼠脾脏T淋巴细胞悬液,采用MTT法筛选苯并芘对T细胞的无细胞毒性的剂量范围,考察刀豆蛋白(ConA)诱导T细胞的增殖情况,筛选出适合剂量作为研究的低中高剂量组;采用ELISA法检测苯并芘对ConA诱导的T细胞分泌的细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4)的影响;通过检测细胞内[Ca2+]i浓度和CaM蛋白表达,考察苯并芘对细胞内Ca2+通路的影响:采用Western Blotting法检测苯并芘对ConA诱导的T细胞的NFAT、NF-κB通路的影响。结果体外实验结果表明:苯并芘对小鼠T淋巴细胞非细胞毒剂量范围为0.1-0.4μg/mL,选取0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.4μg/mL为低中高剂量组;苯并芘能够抑制ConA诱导的T淋巴细胞的增殖;在细胞水平检测到苯并芘对细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4有抑制作用;苯并芘能够抑制T淋巴细胞内[Ca2+]i浓度、抑制CaM蛋白的表达:苯并芘对T细胞的NFAT、NF-κB通路具有抑制作用,上述所有抑制作用均呈剂量相关性。【结论】综上所述,苯并芘对BALB/c小鼠T淋巴细胞在非细胞毒性下、较低剂量范围具有免疫抑制作用,且抑制作用呈剂量依赖性;苯并芘的免疫抑制作用可能是通过NFAT、NF-κB通路实现的。
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