【摘 要】
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采用SMART(switchingmechanismat5endofRNAtranscript)技术,构建了皱纹盘鲍(HaliotisdiscushannaiIno)外套膜组织的全长cDNA表达文库.按Trizol试剂盒的操作程序提取皱纹盘鲍
【机 构】
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中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室,青岛,266003
【出 处】
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国家“863”计划资源环境技术领域第三届海洋生物高技术论坛
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采用SMART(switchingmechanismat5endofRNAtranscript)技术,构建了皱纹盘鲍(HaliotisdiscushannaiIno)外套膜组织的全长cDNA表达文库.按Trizol试剂盒的操作程序提取皱纹盘鲍外套膜组织总RNA,以此为模板,通过PowerScript逆转录酶逆转录合成第一链cDNA;再以第一链cDNA产物为模板,用LD-PCR法合成第二链cDNA.双链cDNA产物经SfiⅠ酶切和ChromaSpin400柱分级分离后,与λTripEx2载体进行连接,体外蛋白包装,即获得皱纹盘鲍外套膜cDNA原始文库.测定其滴度为1.2×106pfu/mL,用PCR方法测得文库的重组率大于90﹪,插入cDNA的长度平均为1.4kb.进行文库的扩增,扩增后的cDNA文库的滴度为4×109pfu/mL.
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