【目的】本文对国产盐酸头孢噻呋混悬注射液通过肌肉或皮下给药时在牛奶中UPLC-MS/MS检测方法及残留消除规律开展研究,为其在奶牛的临床应用提供依据和参考。【方法】提取与衍生化:取样品牛奶500μL,加标50μL,涡动10s,加0.4%二硫赤藓糖醇溶液5.5mL,涡动2min,50℃水浴振荡15min,取出放置室温,加14%碘乙酰胺溶液1.5mL,避光室温下静置衍生30 min,用25%的磷酸溶液调节pH至2.5-2.6,离心15 min（4℃,6000r/min）;净化:依次用10 mL甲醇、10 mL水活化HLB萃取样,取上清液过柱,用3 mL水淋洗小柱之后,用2.5 mL90%乙腈溶液洗脱,洗脱液于氮吹仪吹干,残余物用500μL 0.2%的甲酸溶液复溶,过0.22μm滤膜,取5μL进仪器分析。色谱条件:C₁₈色谱柱（50×2.1 mm,2.6μm）,流动相为0.1%甲酸水溶液:0.1%甲酸乙腈溶液（95:5,V/V）,流速:0.4mL·min^-1,柱温30℃。质谱条件:ESI+,多反应监测,离子源温度150℃,脱溶剂温度450℃,毛细管电压3kV,脱溶剂气流速800L/h。在200μg·kg^-1,1000μg·kg^-1,2000μg·kg^-1三个浓度进行添加回收实验。动物试验:20头健康泌乳奶牛随机均分为皮下和肌肉给药组（2.2 mg/kgbw）。单次给药和连续给药5日,所有奶牛在单次或连续5日给药后1 h、4 h和10 h采集奶样。利用已建立好的牛奶中盐酸头孢噻呋UPLC-MS/MS方法对奶样中的药物进行残留分析。【结果】牛奶中药物在50-2000μg·kg^-1范围内呈良好的线性关系的浓度范围内,方法线性关系良好,相关系数r²大于0.99。定量限（LOQ）和检测限（LOD）分别为50/μg·kg^-1和25μg·kg^-1。平均回收率94.3¹10.2%,日内变异系数均小于9.84%,日间变异系数均小于7.27%;稳定性试验中变异系数均小于20%。牛奶中药物的残留量均低于定量限LOQ(50μg·kg^-1),也小于欧盟规定的最高残留限量值(MRL=100μg·kg^-1),因此其休药期可暂定为零日。【结论】建立的UPLC-MS/MS方法满足分析检测要求,盐酸头孢噻呋混悬注射液在牛奶中的弃奶期为零日。