【摘 要】
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目的 建立一种能快速鉴定横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫的二重PCR方法.方法 从GenBank中获取横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫以及与其同源性较高的虫种的ITS1序列,应用Primer premier 5.0软件设计两对特异性引物,并优化PCR反应体系和反应条件,建立二重PCR法.将横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫与17个相关虫种一起进行PCR扩增,检测方法的特异性；并将质粒进行梯度稀释,检测其灵敏性.应用新
【机 构】
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广西大学动物科技学院,南宁 530004 上海出入境检验检疫局,上海 200135
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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目的 建立一种能快速鉴定横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫的二重PCR方法.方法 从GenBank中获取横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫以及与其同源性较高的虫种的ITS1序列,应用Primer premier 5.0软件设计两对特异性引物,并优化PCR反应体系和反应条件,建立二重PCR法.将横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫与17个相关虫种一起进行PCR扩增,检测方法的特异性；并将质粒进行梯度稀释,检测其灵敏性.应用新建的二重PCR法鉴定从47副猫内脏和40副犬内脏中收集的吸虫,检测该方法的准确性和实用性.结果 新建的二重PCR法能扩增出横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫的目的片段,大小分别为648 bp和279 bp,不与钩棘单睾吸虫、华支睾吸虫、心形咽口吸虫、次睾属吸虫囊蚴、外睾属吸虫囊蚴、藐小棘隙吸虫、叶形棘隙吸虫、弗氏棘口吸虫、似锥低颈吸虫、全冠属吸虫、蛙重盘属吸虫、异尖属线虫、东方次睾吸虫、卫氏并殖吸虫、瓦氏瓦特松吸虫、背孔属吸虫和宫脂属线虫发生交叉扩增,具有较好的特异性；敏感性试验表明,应用新建的二重PCR法,两类吸虫DNA的最低检测值分别为1.49×10-1 pg和1.14×10-1pg.对来自猫内脏和犬内脏的吸虫检测表明,该方法能够区分横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫,并且不与猫狗中其他的吸虫发生交叉扩增.结论 本研究所建立的二重PCR法可用于快速鉴定横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫.
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