AMP通过调控lincRNA-ROR信号通路抑制乳腺癌细胞侵袭

来源 :2017中国营养医学发展论坛暨全军营养医学大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:abwyn12
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  目的:蛇葡萄素(AMP)广泛存在于藤茶中,具有抑制乳腺癌的效应.但是其对乳腺癌细胞侵袭能力的效应尚不清楚,本文旨在探讨AMP 对乳腺癌侵袭能力的影响,为防治乳腺癌提供相关依据.方法:利用Transwell侵袭和迁移实验检测AMP对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7迁移和侵袭能力的影响.通过WB和免疫荧光技术分析AMP对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7转移相关蛋白Snail、Vimentin、MMP-2、MMP-9和E-cadherin表达的影响.使用转染荧光报告基因的MDA-MB-231细胞(Luc-MDA-MB-231)构建裸鼠移植瘤模型,利用活体成像仪(IVIS),定量分析AMP对移植瘤荧光量表达的抑制效应及移植瘤重量和体积的影响.通过免疫组化技术和蛋白免疫印迹(WB)分析AMP对移植瘤转移相关蛋白的影响.尾静脉注射Luc-MDA-MB-231细胞,构建裸鼠体内肺转移模型,通过活体成像仪和HE染色明确AMP对体内肺转移的影响.采用实时荧光定量PCR技术、WB、免疫荧光技术和免疫组化检测AMP是否具有调控乳腺癌细胞lincRNA-ROR、miR-145和ARF6的作用.采用质粒转染和WB技术分析lincRNA-ROR在AMP调控乳腺癌转移中的作用.并通过Transwell侵袭和迁移实验分析,lincRNA-ROR质粒转染后,AMP对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响.结果:Transwell侵袭和迁移实验表明,随AMP浓度的增高,穿过Transwell小室的乳腺癌细胞数量逐渐降低.我们进一步通过WB和免疫荧光技术检测转移相关蛋白的表达,结果显示AMP可下调Snail、Vimentin、MMP-2 和MMP-9蛋白的表达,上调E-cadherin,说明AMP抑制体外乳腺癌细胞的侵袭能力.裸鼠移植瘤和裸鼠体内肺转移模型显示,AMP处理可以抑制移植瘤的重量和体积,抑制乳腺癌细胞肺转移的发生.PCR结果显示AMP可以从体内外降低乳腺癌细胞lincRNA-ROR和miR-145的表达.同样WB、免疫荧光技术和免疫组化实验也证明AMP可以抑制乳腺癌细胞及移植瘤组织中ARF6的表达.质粒转染lincRNA-ROR后,结果发现lincRNA-ROR异常过表达,miR-145表达降低,而ARF6表达增强.为了观察lincRNA-ROR与侵袭和迁移转录子的相关性,我们检测几个转录子蛋白的表达.结果发现,转染组细胞中Snail,Vimentin和MMP-2蛋白表达高于未转染组,E-cadherin表达恰恰相反.并且通过Transwell实验,结果表明lincRNA-ROR过表达可以抑制AMP对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制效应.结论:AMP有效抑制乳腺癌细胞的侵袭能力,lincRNA-ROR/miR-145/ARF6信号通路在其中起到了重要作用.我们的结果表明AMP可为防治乳腺癌提供了新的策略.
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