【摘 要】
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本研究旨在评估肠杆菌OmpA蛋白的免疫原性和免疫保护效果。首先扩增大肠杆菌308-2、C83919、O157、J96、2002-1菌株及克雷伯氏菌、志贺氏菌的ompA基因并系统进化分析,构建重
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院;
【基金项目】
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黑龙江省科技攻关重大项目(GA02B501)
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本研究旨在评估肠杆菌OmpA蛋白的免疫原性和免疫保护效果。首先扩增大肠杆菌308-2、C83919、O157、J96、2002-1菌株及克雷伯氏菌、志贺氏菌的ompA基因并系统进化分析,构建重组质粒pET32a-ompA,宿主菌Rosetta高效表达。Western blot鉴定重组蛋白免疫交叉性,以纯化重组蛋白乳化剂免疫小鼠。初免三周后进行二免,二免后两周用C83919、O157、J96、2002-1菌株及克雷伯氏菌株和志贺氏菌株攻毒。间接ELISA检测血清抗体效价,Elispot方法检测淋巴细胞分泌IL-4和IFN-γ的能力。结果显示,大肠杆菌菌株亲缘关系较近,但克雷伯氏菌与六株肠杆菌亲缘关系较远,分列在两个独立的分支中。重组OmpA蛋白具有免疫交叉性,免疫小鼠后血清抗体效价高达1:64 000,脾淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4的斑点形成细胞数(SFC)与对照组相比显著升高(p<0.05),攻毒后免疫保护性较高。这些结果显示,利用肠杆菌OmpA蛋白作为候选抗原有望开发成一株能仿制奶牛乳房炎中多种革兰氏阴性病原菌的基因工程亚单位疫苗。
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