【摘 要】
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黄瓜棒孢叶斑病作为一种世界性的病害,具有传播迅速、难以防治的特点,对黄瓜的产量造成了巨大的危害。为了预防该病害,本研究旨在开发一种实时聚合酶链式反应方法(RT-PCR)用
【基金项目】
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黑龙江省自然科学基金项目(LH2019C034)
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黄瓜棒孢叶斑病作为一种世界性的病害,具有传播迅速、难以防治的特点,对黄瓜的产量造成了巨大的危害。为了预防该病害,本研究旨在开发一种实时聚合酶链式反应方法(RT-PCR)用于快速、灵敏地检测和定量黄瓜叶片中的黄瓜棒孢叶斑病菌(Corynespora cassiicola)。本文基于黄瓜棒孢叶斑病菌(C.cassiicola) DNA的肌动蛋白基因(actin)序列设计了特异性引物CAF2/CAR2,可用于区分黄瓜上的主要病害并扩增出186bp的特异性条带。为了建立最优体系,本研究测试了3种DNA浓度、3种引物浓度以及4种退火温度:当退火温度为60℃,DNA模板量为3μL、引物量加入0.2μL(10mmol/L)时为最佳的体系条件,并利用阳性标准品建立了黄瓜棒孢叶斑病菌的标准曲线。此方法对黄瓜棒孢叶斑病DNA浓度检测范围为1.36×(10～(-7)～10) ng/μL,比普通常规PCR可检测的灵敏度高103倍;验证荧光定量PCR体系组内与组间的重复性和稳定性,其变异系数均小于2%,本研究为黄瓜棒孢叶斑病的预测预报和防治提供了技术手段。
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