【摘 要】
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细菌素是代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一类具有抑菌活性的多肽或前体多肽。细菌素由于具有抗菌活性强、不易产生耐药性等优点,有望成为抗生素替代品和新型食品防腐剂
【机 构】
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浙江工商大学食品与生物工程学院浙江省食品微生物技术研究重点实验室;
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细菌素是代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一类具有抑菌活性的多肽或前体多肽。细菌素由于具有抗菌活性强、不易产生耐药性等优点,有望成为抗生素替代品和新型食品防腐剂。到目前为止,Nisin是唯一被商业化应用于食品防腐行业的细菌素,而一些新的细菌素的发现弥补了Nisin的抗菌谱窄和抗性等问题。本实验室筛选得到一株具有广谱抗菌性的植物乳杆菌ZJ316。在全基因组测序基础上,通过序列比对发现其基因簇中存在IIb类细菌素基因plnJ和plnK。运用pET-32a构建表达型载体pET-32a-plnJ和pET-32a-plnK,转化大肠杆菌BL21。在1 mMIPTG、16℃、160 rpm的条件下过夜诱导,实现目的蛋白在大肠杆菌中的高效表达。超声破碎和离心后,收集含有组氨酸(His6)标记的融合蛋白上清液,通过镍柱纯化,得到高纯度重组蛋白。脱盐浓缩后,用肠激酶酶进行酶切,得到两种蛋白PlnJ和PlnK,分子量的大小分别为2.9k Da和3.5 k Da。以大肠杆菌和单增李斯特菌为指示菌,采用琼脂扩散法进行抑菌活性研究。结果表明PlnJ和PlnK都具有一定的抑菌活性,但PlnJK的抗菌活性远远大于单独的PlnJ或PlnK。
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