【摘 要】
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本研究将猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白保护性抗原片段COE1与枯草杆菌芽孢外层衣壳蛋白基因cotB进行融合,构建表面展示S蛋白保护性抗原片段的重组芽孢.通过将cotB基因与COE1编码序列进行重组,构建融合表达cotB-COE1的整合型重组质粒,重组质粒与枯草杆菌淀粉酶基因amyE双交叉,获得重组枯草杆菌,对重组枯草杆菌进行淀粉酶活性分析、PCR扩增鉴定,提取重组芽孢衣壳总蛋白进行Wester
【机 构】
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四川农业大学动物医学院动物微生态研究中心,四川成都,611130 成都农业科技职业学院,四川成都,
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本研究将猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白保护性抗原片段COE1与枯草杆菌芽孢外层衣壳蛋白基因cotB进行融合,构建表面展示S蛋白保护性抗原片段的重组芽孢.通过将cotB基因与COE1编码序列进行重组,构建融合表达cotB-COE1的整合型重组质粒,重组质粒与枯草杆菌淀粉酶基因amyE双交叉,获得重组枯草杆菌,对重组枯草杆菌进行淀粉酶活性分析、PCR扩增鉴定,提取重组芽孢衣壳总蛋白进行Western blot分析及对重组芽孢进行免疫荧光显微镜观察.通过淀粉酶活性分析与PCR鉴定结果表明该融合基因成功整合于枯草杆菌染色体上;Western blot分析结果在67.78kDa处获得一条特异性的蛋白杂交带;使用生物素标记抗体免疫荧光显微镜观察重组芽孢具有特异性荧光信号.结果表明PEDV S蛋白保护性抗原片段COE1成功地展示于枯草杆菌芽孢表面.
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