[目的]比较几种不同的固定和标记方法在流式细胞术检测博莱霉素诱发原代培养肝细胞内磷酸化H2AX (γH2AX)的表达水平、以及二者剂量反应关系上的差异.[材料和方法]研究以原代小鼠肝细胞为受试细胞，以博莱霉素为受试物，将不同浓度(0.1、0.2、1、5、10、20、40、60 μ mol/L)的博来霉素处理原代培养的肝细胞3h后，结合CCK-8法检测受试物对肝细胞生存率的影响；将受试物处理后的肝细胞分别用70％乙醇、10％中性甲醛和2％多聚甲醛3种固定剂固定细胞30 min后，然后通过组合FITC单标法和FITC-PI双标法检测肝细胞内γH2AX的表达水平，并分析和比较几种不同的固定和标记方法对流式细胞术检测博来霉素诱发肝细胞内γH2AX的表达水平、以及二者剂量反应关系的影响.[结果]CCK-8法的毒性检测结果显示各浓度组的博莱霉素对肝细胞毒性的影响均比较小，且在受试物作用浓度范围内肝细胞的相对存活率均在80％以上；用6种固定和标记方法均发现受试物博莱霉素与细胞内γH2AX的表达水平存在较好的剂量反应关系，即γH2AX的表达水平随着受试物作用浓度的增加而增加；采用不同的固定和标记方法所得的流式数据结果均较符合直线方程，且乙醇单标法组、乙醇双标法组、中性甲醛单标法组、中性甲醛双标法组、多聚甲醛单标法组以及多聚甲醛双标法组对应的决定系数分别为0.838、0.913、0.785、0.873、0.905、0.922.[结论]应用流式细胞术多聚甲醛固定法检测博莱霉素诱发原代培养肝细胞内γ H2AX的表达水平，优于乙醇和中性甲醛固定法，且应用双标法的效果优于单标法，提示用多聚甲醛双标法检测细胞内γ H2AX的表达水平效果最优.