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目的:fascin在食管癌(ESCC)等肿瘤中过表达,但其过表达调控机制尚不清楚。本研究的目的就是鉴定食管癌细胞中fascin基因的核心启动子,并检测该基因的甲基化情况,探讨ESCC中fascin基因的调控模式。方法:以含有fascin基因-2900/+122片段的pGLB表达质粒(pBF-2900)为基础,联合采用渐进式截短策略、嵌套缺失技术以及双荧光素酶检测系统,鉴定出fascin基因的核心启动子区域;进一步采用酶切方法对核心启动子区的转录调控元件进行缺失,确定fascin核心启动子内的转录调控元件;采用MSP(-56/+114)和BGS技术(-218/+55)对食管癌细胞系和组织样本进行启动子区甲基化检测;从EC109细胞扩增fascin基因的+168/+2838片段(包括第一外显子和部分第一内含子),分别克隆到含有fascin基因核心启动子和SV40启动子的表达载体下游,并联合采用渐进式截短策略和双荧光素酶检测系统确认该区域对启动子的调控活性;然后用BGS方法分别检测食管癌细胞系和癌组织样本中该区域(+237/+513、+560/+859和+ 1671/+2051)甲基化情况。结果:双荧光素酶检测系统分析提示fascin基因的核心启动子位于-74/-40区域;生物信息学分析发现-100/+1区域含有一个TATA盒、一个GC盒和CREB/AP-1结合位点;进一步的分段缺失表明,当—47/—44(含有CREB/AP-1结合位点)或者—47/—14 (含有CREB/AP—1结合位点和TATA盒)缺失时,报告基因活性变化不大,当-107/-44(含有GC盒和CREB/AP-1结合位点)或者-107/-14(含有GC盒、CREB/AP-1和TATA盒)缺失时,报告基因活性显著减低,提示GC盒发挥重要作用;运用MSP技术和BGS技术检测fascin启动子区甲基化情况发现,无论是细胞系或者临床样本该启动子区均以非甲基化形式存在。双荧光素酶分析结果显示, +168/+2838区域对fascin的启动子区有抑制作用。进一步分析发现,发挥抑制作用的主要为+262/+2838片段;该区段的BGS检测显示,在EC109、EC18、SHEE 3个细胞系和5对临床样本中+560/+859(位于第一外显子区)区中41个CpG岛均以超甲基化形式存在,提示抑制作用可能由于第一外显子的甲基化调控。结论:在EC109细胞中,fascin基因的核心启动子位于-74/-40区域,GC盒是重要的调控元件;第一外显子区的甲基化对启动子活性存在一定抑制作用,却不足以完全阻止启动子的激活;fascin基因在食管癌中过表达可能由于启动子被反式激活而不是其低甲基化调控