猪白细胞介素-6的原核表达及其生物学活性研究

来源 :中国畜牧兽医学会2010学术年会暨第二届中国兽医临床大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wdyan297
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本研究采用RT-PCR方法自细菌脂多糖(LPS)刺激的猪脾脏细胞总RNA中扩增克隆出了猪白介素-6(porcine inteleukin-6,PolL-6)成熟肽基因,并亚克隆入pQE30载体进行原核表达,对表达的融合重组猪白介素-6(rPoIL-6)蛋白通过尿素变性、低浓度复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,采用rPoIL-6 ELISA试验方法检测rPoIL-6蛋白与抗PoIL-6单抗发生特异性免疫反应的活性。采用MTS法检测rPoIL-6蛋白的促猪脾脏细胞的增殖活性。结果表明:成功克隆了rPoIL-6成熟肽基因,基因全长555bp;表达的rPoIL-6蛋白分子量大小约为20Ku;经纯化后的蛋白质纯度在95%以上;rPoIL-6蛋白能和抗PoIL-6单抗发生特异性反应,MTS法检测表明,rPoIL-6蛋白具有促进猪脾脏细胞的增殖活性。
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