【摘 要】
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目的:声学手段已广泛应用于检查人体器官,但能否应用检查人体的细胞?利用原子力声显微镜(AFM)观察大鼠心肌母细胞的细胞骨架(cytoskeleton).为声学手段研究病理状态的心肌母细胞打下基础.方法:使用Veeco DI 3100型原子力声显微镜(AFM),DNP-10型探针(k=0.1134N/M,f=22.26KHz).采用CD56免疫磁珠与CD56阳性的细胞特异性的结合,将H9c2大鼠心肌
【机 构】
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上海同济大学附属东方医院 上海同济大学声学研究所
【出 处】
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中国超声医学工程学会第十二届全国超声心动图学术会议
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目的:声学手段已广泛应用于检查人体器官,但能否应用检查人体的细胞?利用原子力声显微镜(AFM)观察大鼠心肌母细胞的细胞骨架(cytoskeleton).为声学手段研究病理状态的心肌母细胞打下基础.
方法:使用Veeco DI 3100型原子力声显微镜(AFM),DNP-10型探针(k=0.1134N/M,f=22.26KHz).采用CD56免疫磁珠与CD56阳性的细胞特异性的结合,将H9c2大鼠心肌母细胞培养物用50-200nm直径的CD56免疫磁珠、在MACS分离磁板上分离出CD56阳性的肌母细胞.样品放置于AFM扫描台上,XY轴平面20μm×20μm,Z轴方向±1.5mm.使用氮化硅(Si3N4)悬壁(Park Scientific Instruments),弹性常数可选0.1134N/m,针尖曲率半径约10～20nm,扫描速率22.26KHz.为尽量保证细胞生活状态下的实时性状.所有图像经仪器配置软件(Thermomicroscopes proscan image processing software version 2.1)处理.
结果:在H9c2心肌母细胞核外的细胞质中,可以清晰显示网状结构的细胞骨架结构及微管结构,在距核较远处可见成束的微丝结构;致密斑靠近细胞膜的内面,为片状较亮的光斑,微丝附着其上.且可见致密斑、致密体和中间丝.相邻的致密体之间由中间丝相连,构成心肌母细胞的菱形网架,在细胞内起着支架作用.心肌母细胞的高度为1500nm.其中心为突出的细胞核区域,细胞核膜基质面不光整,附有多个大小不等的强回声颗粒(核糖体).细胞核膜连续不完整,可见多处有连续中断,为核孔,直径约80-120nm.
结论:细胞骨架是由微管、微丝、中间丝和微梁网组成,它不仅在维持细胞形态,承受外力、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用,而且还参与许多重要的生命活动.细胞的特定形状以及运动等,均有赖于细胞骨架.原子力显微镜可以从原子水平直接观察活的心肌母细胞,可以完整显示心肌母细胞的细胞膜、细胞骨架、细胞核以及细胞之间连接的形态结构.
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