【摘 要】
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鲶爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)野生型菌株HSN-1分离自患病的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco).其自带的两个质粒pEI1和pEI2所编码的蛋白EseH,EseI和EscD通过同源性比对发现与三型分泌系统(type Ⅲ secretion system,T3SS)蛋白具有相似性.为研究质粒编码的这3个基因在鲶爱德华氏菌致病机制中的作用,我们首先对两
【机 构】
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华中农业大学,湖北武汉430070;中国科学院水生生物研究所,湖北武汉430072 中国科学院水生
【出 处】
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2012年全国博生研究生学术论坛——可持续的水产养殖：理论与实践
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鲶爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)野生型菌株HSN-1分离自患病的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco).其自带的两个质粒pEI1和pEI2所编码的蛋白EseH,EseI和EscD通过同源性比对发现与三型分泌系统(type Ⅲ secretion system,T3SS)蛋白具有相似性.为研究质粒编码的这3个基因在鲶爱德华氏菌致病机制中的作用,我们首先对两个质粒进行了消除.基于同源质粒不相容的原理,采用Kan正选择和SacB负选择相结合的方法将质粒消除后再通过反向PCR方法将敲除了目的基因的质粒移回即得到基因缺失突变株.通过黄颡鱼体内毒性实验发现,所有突变株的半致死剂量微高于野生型,其中△eseI和△escD比野生型HSN-1高0.2个对数单位,而△eseH与野生型相似.对鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)的侵袭实验发现突变株△eseH, △eseI及pEI1-pEI2-与野生型相比降低了对EPC的粘附力,而△eseI和pEI1-pEI2-还表现为抑制侵袭.采用迟缓爱德华氏菌(Ewardsiella tarda)为宿主检测3种蛋白的分泌特点,发现EseH和EseI可以分泌到细菌胞外,而EscD不能分泌到胞外；EseH蛋白的分泌通过依赖T3SS实现,而EseI分泌不依赖T3SS.另外,通过酵母双杂交实验证明EscD与EseH或EseI没有相互关系,即EscD并非EseH或EseI的分子伴侣.最主要的是,采用TEM-1 β内酰胺酶系统发现EseH和EseI能够被输送进宿主细胞内.本研究可以帮助人们理解鲶爱德华氏菌质粒在细菌致病机制方面的作用.
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