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目的:1.提取、培养人尿源干细胞(Urine-derived Stem Cells, USCs),研究其生物学特性,为实验提供新型、丰富的种子细胞。2.从USCs的条件培养基(conditioned medium,CM)中提取Exosomes,进行鉴定,为进一步的研究提供充足原料。方法:分离、培养、鉴定USCs,从P3代USCs培养液上清中超高速离心法分离提取囊泡,透射电镜分析其形态、大小,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)法检测特异性分析CD9、CD63和CD81。结果:1.从健康男性的新鲜尿液中成功分离出USCs。USCs大约5-7天开始贴壁生长,12-16天类似成纤维细胞样的细胞呈集落生长,传代2-3次后细胞逐渐被拉长,保持均一的成纤维细胞样生长。流式细胞术检测P3代USCs,结果显示该细胞表达CD29、CD90、CD73、CD44,不表达CD34和HLA-DR,表明USCs符合间充质干细胞的特征。体外进行成骨、成脂、成软骨诱导培养,USCs成功分化为成骨、成脂、成软骨细胞。2.成功提取了P3代USCs培养上清中的Exosomes。透射电镜显示Exosomes大小在30-120nm,囊泡样,表达进化上相对保守的蛋白CD9、CD63和CD81。结论:1. USCs是具有良好应用前景的理想的种子细胞。2. USCs分泌的Exosomes表达特异性的进化相对保守的蛋白质。3. USCs的CM中可以提取大量泌的Exosomes,为进一步的实验构想提供了充足的原料。