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目的:观察PTEN编码蛋白对TGF-β1刺激下瘢痕成纤维细胞转分化的抑制作用及其机制。
方法:用重组PTEN腺病毒转染体外培养的人瘢痕成纤维细胞,实验分为正常组、TGF-β1刺激组(给予TGF-β1刺激) 、Ad-PTEN+ TGF-β1组(PTEN基因转染后给予TGF-β1刺激) 、空载体(Ad-Laz)+ TGF-β1组(空载体转染后给予TGF-β1刺激),倒置荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,RT-PCR检测PTEN mRNA表达,Western blot检测各组中α-SMA、Akt 、p-Akt 表达水平。
结果:PTEN基因转染瘢痕成纤维细胞48h后可见明显绿色荧光蛋白表达; PTEN转染组PTEN蛋白及PTEN mRNA表达较正常组及空载体转染组细胞均显著上升(均p<0.05)。在正常组、TGF-β1刺激组、Ad-PTEN+ TGF-β1组、Ad-Laz + TGF-β1组中,TGF-β1刺激组及Ad-Laz + TGF-β1组较正常组α-SMA及p-Akt表达显著上升(均p<0.05); Ad-PTEN + TGF-β1组较TGF-β1刺激组及Ad-Laz + TGF-β1组α-SMA及p-Akt表达明显下降(均p<0.05);各组细胞Akt表达水平差异不明显(p>0.05) 。
结论:PTEN能够抑制TGF-β1诱导的瘢痕成纤维细胞转分化,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt通路活化。