论文部分内容阅读
目的：本文旨在阐明ADDLs影响AMPA受体细胞膜表面表达及其在突触分布的分子机制,从而为基于AMPA受体跨膜转运的神经保护药物的研发提供新的靶点.方法：1、利用原代培养海马神经元,通过蛋白质印迹和细胞免疫荧光等方法观察ADDLs对海马神经元GluA1-3亚基在细胞膜及突触表达的影响及D1受体激动剂(SKF81297)、中药左旋千金藤啶碱(L-SPD)的保护作用机制.2、通过Morris水迷宫、条件性恐惧等行为学实验比较APP/PS1转基因小鼠和WT小鼠学习记忆能力的差异；通过蛋白质印迹和高尔基染色比较APP/PS1小鼠和WT小鼠海马GluA1-3亚基膜表面表达的差异以及树突棘密度和形态的改变；腹腔注射L-SPD,观察其对APP/PS1小鼠海马GluA1-3亚基膜表面的表达及树突棘密度和形态的影响以及是否改善APP/PS1小鼠认知功能障碍.结果：1.ADDLs减少海马神经元细胞膜表面AMPA受体相关亚基的表达.蛋白质印迹结果显示用ADDLs(500nM)处理培养的原代海马神经元,AMPA受体GluA1/GluA2亚基细胞膜表面表达量在3h、6h、24h均降低,而ADDLs对GluA3亚基细胞膜表面表达及总AMPA受体表达量均没有明显影响.2.ADDLs通过PKA依赖信号通路减少膜表面AMPA受体表达,激活D1/PKA信号通路可以改善ADDLs引起的AMPA受体亚基磷酸化水平及膜表面表达的降低.3.L-SPD(3 mM)通过D1/PKA信号通路改善ADDLs引起的AMPA受体磷酸化水平和膜表面表达的降低以及突触分布的减少.4.L-SPD(10 mg/kg,i.p.)可以改善APP/PS1转基因小鼠受损的学习和记忆.5.L-SPD(10 mg/kg,i.p.)可以改善APP/PS1转基因小鼠海马AMPA受体磷酸化水平和膜表面表达的降低以及树突棘密度和形态的改变.结论：1.ADDLs降低AMPA受体在细胞膜表面表达及突触的分布；2.ADDLs对AMPA受体的影响是通过下调GluA1亚基磷酸化实现的；3.激活D 1/PKA信号通路能够改善ADDLs对AMPA受体的影响；4.L-SPD对ADDLs引起的AMPA受体在细胞膜表面及突触表达的降低及APP/PS1转基因小鼠的认知功能障碍具有保护作用.