【摘 要】
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[目的]本研究旨在通过人源噬菌体抗体库筛选抗LAG3新型单抗，在此基础上对新抗体进行纯化表达、特异性鉴定及生物学功能初步验证，为肿瘤免疫治疗的研究提供新的抗体制剂，并奠定理论基础。[材料和方法]1)抗体筛选：通过全人源噬菌体库进行目的抗体的筛选，经过3轮淘洗后，将筛选到的噬菌体克隆进行ELISA检测，得到与目的抗原(人LAG3)特异性结合的克隆，随后进行序列分析确认单链抗体序列；2)真核质粒的构建
【机 构】
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中国人民解放军原海军总医院中心实验科,北京,100048
【出 处】
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中国生物工程学会第十二届学术年会暨2018年全国生物技术大会
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[目的]本研究旨在通过人源噬菌体抗体库筛选抗LAG3新型单抗，在此基础上对新抗体进行纯化表达、特异性鉴定及生物学功能初步验证，为肿瘤免疫治疗的研究提供新的抗体制剂，并奠定理论基础。[材料和方法]1)抗体筛选：通过全人源噬菌体库进行目的抗体的筛选，经过3轮淘洗后，将筛选到的噬菌体克隆进行ELISA检测，得到与目的抗原(人LAG3)特异性结合的克隆，随后进行序列分析确认单链抗体序列；2)真核质粒的构建及抗体表达纯化：将单链抗体中的VH区和VL区分别构建到human IgG 重轻链载体中，将真核质粒瞬转到293F细胞中进行高量表达，表达上清经ProteinA亲和层析后浓缩换液，得到纯化的抗体。通过SDS-PAGE电泳对纯化所得到的克隆抗体进行还原性及非还原性的鉴定，确定所得抗体大小和纯度；3)特异性鉴定：分别使用人LAG3、鼠LAG3、人CD4蛋白包被ELISA板，鉴定筛选得到的抗体与目的蛋白的特异性结合。
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