【目的】为解决临床上新发病毒性传染病难以快速诊断的难题。【方法】本研究利用新城疫病毒阳性尿囊液样品对核酸酶使用量进行了摸索,确定了除去宿主和游离核酸的最佳核酸酶使用量,根据临床样品的特点,确定了富集临床样品中病原微生物的差速离心策略,最终建立了基于随机PCR的未知病毒快速检测方法。利用该方法对1份野鸟粪便混合样本(36个)中的微生物进行了检测,并利用特异性PCR对随机PCR检测结果进行了验证和分析。【结果】在新城疫尿囊液阳性样品核酸酶使用量的探索中,发现在200μL样品中,加20μL DNase I和20μL RNase A对宿主核酸和游离核酸去除效果较佳。对野鸟样品的检测发现其中存在新城疫病毒基因,利用新城疫病毒特异性RT-PCR方法对检测结果进行验证,确认1份野鸟粪便样品为新城疫病毒阳性,证明随机PCR检测结果可信。【结论】本研究初步建立了基于随机PCR的畜禽未知病毒检测方法,为不明原因疾病和新发传染性疾病的快速诊断提供了技术手段。