【摘 要】
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目的 鉴定可作为环境化学物4-甲基亚硝胺基-1(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)诱导肺癌发生潜在标志物的循环miRNAs.方法 7周龄雄性F344大鼠系统给予烟草特异性致癌物NNK处理(皮下
【机 构】
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广州医科大学化学致癌研究所呼吸疾病国家重点实验室,广东广州510182
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目的 鉴定可作为环境化学物4-甲基亚硝胺基-1(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)诱导肺癌发生潜在标志物的循环miRNAs.方法 7周龄雄性F344大鼠系统给予烟草特异性致癌物NNK处理(皮下注射,每周3次,连续20周),常规饲养至第95周终止实验.期间大鼠眼眶静脉丛采血分别采集NNK处理第1,5,10,20,60,80和95周血液.取第60周大鼠血清进行小分子RNA Solexa测序,分析对照组和NNK处理组大鼠血清miRNA差异表达谱,筛选出8个差异表达miRNA作为候选miRNA.运用荧光定量PCR方法,检测候选miRNA在大鼠个体血清中表达水平.最终选择miR-206和miR-133b进一步检测其在NNK诱导肺癌发生发展不同时期(第1,5,10,20,60,80和95周)血清中表达改变.同时,我们检测了miR-206和miR-133b在大鼠肺癌组织、癌旁正常组织及几株肺癌细胞株中表达情况；为了评价miR-206和miR133b作为肺癌病人标志物的可能性,我们分别检测了25例吸烟致肺癌病人及25例正常人血清中miR-206和miR-133b的表达水平,受试者工作特征曲线(ROC)分析评价其作为肺癌标志物的潜力.结果 小分子RNA Solexa测序结果表明,NNK可以诱导大鼠血清miRNA表达改变.在NNK诱导肺癌发生早期,与对照组相比,NNK处理组大鼠血清miR-206和miR-133b显著性上调表达；在第20周达高峰,后期其表达水平呈下降趋势.对比癌旁正常肺组织,miR-206和miR-133b在肺癌组织中明显低表达.与正常人支气管上皮细胞16HBE相比,miR-206和miR-133b在多种肺癌细胞中均显著性低表达.与正常人相比,肺癌病人血清miR-206和miR-133b明显低表达,ROC分析表明miR-206和miR-133b曲线下面积分别为0.9024和0.8720.结论 我们的结果表明,烟草特异性致癌物NNK可诱导大鼠血清miRNA表达谱改变；循环miR-206和miR-133b可能作为NNK诱导肺癌发生的潜在标志物,并且可能参与肺癌的发生.
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